貢菊種苗離體快繁與復(fù)壯技術(shù)的研究.pdf

1、貢菊Dendranthema morifolium(Ramat.) Tzvel.cv.Gongju又稱黃山貢菊、徽州貢菊，是菊科菊屬多年生草本植物;其根、莖、葉、花均可入藥，具有清肝明目等功效，可用于頭風(fēng)，目眩，咽喉腫痛，癰腫疔毒等癥。菊花作為原料藥入制中成藥已有多年歷史，且療效確切，市場(chǎng)對(duì)其需求與日俱增，如杞菊地黃丸、三寶片、清熱明目茶等。菊在產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)上主要采用扦插和分株等無(wú)性繁殖方式，極易受到各種病毒等微生物侵害;在生產(chǎn)中隨著栽培

2、時(shí)間的推移，則病害加重，導(dǎo)致植株減產(chǎn)，種質(zhì)退化，嚴(yán)重的直接導(dǎo)致植株死亡;而物理、化學(xué)等防治措施對(duì)病毒病的防治效果并不顯著。
　　目的：建立貢菊離體快繁體系，對(duì)貢菊種質(zhì)資源進(jìn)行復(fù)壯，保證植株的遺傳穩(wěn)定性;為保證貢菊種質(zhì)可持續(xù)利用、貢菊優(yōu)質(zhì)種苗的規(guī)范化(GAP)、產(chǎn)業(yè)化、規(guī)?；a(chǎn)奠定基礎(chǔ)。
　　方法：通過(guò)對(duì)引種到粵東地區(qū)的改良品種貢菊進(jìn)行實(shí)地調(diào)查，分析其種質(zhì)退化的原因，再采用莖尖離體培養(yǎng)，獲得的組培苗采用熱處理結(jié)合莖尖二次培養(yǎng)

3、的方法脫毒，對(duì)貢菊種質(zhì)進(jìn)行復(fù)壯，并以腋芽增殖方式進(jìn)行繼代培養(yǎng)，建立貢菊離體快繁體系，保證植株的遺傳穩(wěn)定性;試驗(yàn)主要采用了文獻(xiàn)研究、實(shí)地調(diào)查、單因素試驗(yàn)探討、正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)等方法進(jìn)行。
　　結(jié)果：在查閱了大量與本研究相關(guān)的國(guó)內(nèi)外參考文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上，歸納總結(jié)了藥菊種質(zhì)的研究現(xiàn)狀，內(nèi)容涵蓋了藥菊的本草考證、生藥學(xué)、化學(xué)、藥理藥效、臨床應(yīng)用、生物學(xué)、脫毒方法及脫毒鑒定、組織培養(yǎng)研究進(jìn)展等方面的研究。通過(guò)試驗(yàn)研究，篩選出了初代培養(yǎng)、繼代增殖

4、、壯苗生根、煉苗移栽等階段的最佳培養(yǎng)基及培養(yǎng)技術(shù)，優(yōu)化和完善了貢菊組培快繁體系;建立了適用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的貢菊脫毒技術(shù)和鑒定方法，可行性強(qiáng)，成本低廉，脫毒效果顯著。
　　結(jié)論：⑴無(wú)菌苗的獲取:70％酒精和0.1％氯化汞為較適合的消毒溶劑，對(duì)于貢菊莖尖外植體，70％酒精消毒45 s后再用0.1％氯化汞消毒3 min的時(shí)間配比對(duì)其消毒效果較理想;對(duì)于貢菊莖節(jié)，70％酒精消毒30 s后再用0.1％氯化汞消毒11 min的滅菌時(shí)間配比對(duì)其消

5、毒效果較理想。⑵腋芽誘導(dǎo):以MS作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，植物生長(zhǎng)物質(zhì)以植物細(xì)胞分裂素6-BA和生長(zhǎng)素NAA的誘導(dǎo)效果較好，MS+6-BA1.5-2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L培養(yǎng)基有利于腋芽形成，45 d的增殖倍數(shù)為5.3-5.8，且腋芽生長(zhǎng)良好。⑶各添加物對(duì)瓶苗生長(zhǎng)的影響:在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的調(diào)整上，大量元素的用量為150mL/L，微量元素的用量為1 mL/L，維生素的用量為1.5 mL/L時(shí)能明顯促進(jìn)組培苗的生長(zhǎng);較為適宜的瓊脂濃度為4

6、 g/L;椰子汁為天然添加物的首選，且在50-200 mL/L的濃度范圍內(nèi)，組培苗的生長(zhǎng)隨著濃度的增長(zhǎng)而加快，表現(xiàn)為苗高逐漸增高、莖粗壯、葉濃綠且葉片增大;根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果，最利于貢菊組培苗壯苗的組合培養(yǎng)基為:1/2MS+蔗糖30 g/L+AC1g/L+NAA0.1 mg/L+IBA0.1 mg/L，其中，蔗糖對(duì)貢菊組培苗的壯苗生長(zhǎng)影響最大。⑷生根誘導(dǎo)培養(yǎng):培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.05 mg/L+NAA0.05 mg/L適宜組培苗生

7、根;活性炭的添加有利于貢菊組培苗側(cè)根系的生長(zhǎng)。⑸煉苗程序:組培苗生根誘導(dǎo)培養(yǎng)30天，待組培苗長(zhǎng)至五片以上有效葉片，開蓋5天適應(yīng)環(huán)境鍛煉，水培3天，然后轉(zhuǎn)至蛭石∶河沙(1∶1)的基質(zhì)中定植。⑹在脫毒方法上采用了熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)及二次培養(yǎng)的方法;在脫毒鑒定上采用了性狀鑒定和指示植物鑒定兩種方法對(duì)所獲得的離體再生苗進(jìn)行鑒定。未經(jīng)過(guò)脫毒處理的組培苗在長(zhǎng)期繼代培養(yǎng)中表現(xiàn)出葉片黃化、黑斑、卷葉、縮頂?shù)劝Y狀，而脫毒苗未表現(xiàn)其相應(yīng)癥狀，且長(zhǎng)勢(shì)較好。指