桑蠶繭、蛹中黃酮類化合物及其相關(guān)基因表達(dá)分析.pdf

1、我國(guó)彩色繭絲蠶品種資源豐富，彩色繭絲具有保濕、抑菌、抗氧化、防紫外線等特性；而蠶蛹不僅富含蛋白質(zhì)且含有多種活性物質(zhì)及大量人體所需的微量元素。因此，繭殼和蠶蛹的開(kāi)發(fā)日趨倍受關(guān)注。彩色繭中含有豐富的色素，主要來(lái)自桑葉，經(jīng)蠶采食后，由中腸上皮細(xì)胞吸收后進(jìn)入血淋巴，最后進(jìn)入絲腺并在絲膠層積累，進(jìn)而使繭絲著色。相關(guān)研究表明，家蠶綠繭系形成主要色素為黃酮類色素。本研究以不同繭色蠶品種為材料，檢測(cè)蠶繭和蠶蛹中黃酮類化合物的含量，并通過(guò)高效液相色譜法(

2、High Performance Liquid Chromatography，簡(jiǎn)稱HPLC）分析蠶蛹中蘆丁、槲皮素、異槲皮苷、紫云英苷和綠原酸的含量，這為更好地開(kāi)發(fā)利用天然彩色繭和蠶蛹資源提供重要的參考。采用熒光定量PCR技術(shù)分析了不同品種五齡期家蠶中腸、脂肪體和絲腺中綠繭相關(guān)基因UGT86和UGT65以及黃繭相關(guān)基因CBP和Cameo1的表達(dá)情況，為探討家蠶組織之間的色素差異及綠繭的形成機(jī)理，提供新的參考。
　　本研究主要內(nèi)容包

3、括：⑴白繭、黃繭和綠繭繭殼中的黃酮類化合物的含量分析。綠繭繭殼中的黃酮類化合物的含量顯著高于黃繭和白繭，并且綠繭系的繭色深淺與黃酮類化合物的含量高低直接相關(guān)。黃色繭殼中黃酮類化合物含量與白色繭殼之間不存在明顯差異，甚至有少數(shù)黃色繭品種的繭殼中黃酮類化合物的含量低于白色繭品種的現(xiàn)象，說(shuō)明并非所有彩色繭的繭殼中黃酮類化合物的含量都比白色繭高。⑵白繭、黃繭和綠繭品種蛹中的黃酮類化合物的含量分析。白色、黃色以及綠色3種繭色蠶蛹中的黃酮類化合物的

4、含量介于2.00 mg/g～5.00 mg/g之間。綠繭蛹中黃酮類化合物的含量相對(duì)其他繭色的蛹雖然偏高，卻未達(dá)到顯著水平，但部分品種間蛹中黃酮類化合物的含量存在明顯差異。同一家蠶品種蛹中黃酮類化合物的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于繭殼中的含量（1～10倍不等）。⑶提供了一種利用HPLC檢測(cè)家蠶蛹中黃酮類化合物的含量的方法。檢測(cè)蠶蛹中四種黃酮類化合物的色譜條件為：流動(dòng)相由乙睛和甲酸組（A：0.05％H3PO4水溶液，B：乙腈)，采用梯度洗脫，洗脫程序?yàn)椋?

5、～9min，B20%～80%；9～12min，B80%；12～12.1min，B80%～20%；12.1～16min，B20%；體積流量：0.8mL/min；進(jìn)樣量：20uL；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；柱溫：室溫。本試驗(yàn)操作簡(jiǎn)單、快捷、靈敏度高，為蠶蛹在食用方面的開(kāi)發(fā)提供了實(shí)用可靠的檢測(cè)方法。⑷不同繭色蛹中黃酮類化合物的分離及其鑒定。通過(guò)HPLC檢測(cè)家蠶蛹中蘆丁、槲皮素、異槲皮苷、紫云英苷4種黃酮類化合物以及綠原酸的含量：本研究所檢測(cè)的蠶蛹

6、樣品中均不含有綠原酸；不同繭色的蛹中總黃酮類化合物的含量不同，相同繭色不同品種蛹中黃酮類化合物的種類和含量也存在明顯差異，綠色繭的蠶蛹中槲皮素、異槲皮苷含量較其他繭色的蛹較高，這兩種黃酮類化合物可作為綠色繭的標(biāo)記物；黃色繭的蛹不含或含有較低的蘆丁。⑸綠繭相關(guān)基因UGT86和UGT65及黃繭相關(guān)基因CBP和Cameo1的相對(duì)表達(dá)含量。檢測(cè)了不同繭色品種五齡幼蟲中腸、絲腺和脂肪體中4個(gè)繭色相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量，黃色繭品種CBP的表達(dá)相對(duì)較高