27335.石斛constanslike基因的克隆與表達分析

1、CloningandExpressionAnalysisofCONSTANSlikeGinDendrobiumenesDendrobiumbShengpengZhangSupervisor：ProfessorJunDuanAthesissubmittedfortheDegreeofMaster(Doctorate)attheGraduateSchoolofTheChineseAcademyofSciencesDate摘要石斛CONSTA

2、NSlike基因的克隆與表達分析IYIlllll18I[15l7Illl3113114Ill摘要成花是大多數(shù)高等植物生活史中一個重要的由營養(yǎng)生長轉(zhuǎn)向生殖生長的復(fù)雜的發(fā)育過程。植物成花分子機理研究已在擬南芥等模式植物上取得了巨大進展。石斛是一類重要的開花植物，具有很高的觀賞價值，是蘭科植物中栽培較為廣泛的種類之一，花期調(diào)控是其生產(chǎn)中的關(guān)鍵技術(shù)之一。光照是影響石斛蘭成花的重要因素。本文從美花石斛(DendrobiumloddigesiiRo

3、lfe)和秋石斛(Dendrobiumhybrida)中克隆了光周期調(diào)控途徑中的關(guān)鍵基因CONSTANSlike(COL)，并研究了這兩個基因在光周期途誘導(dǎo)下的表達情況。主要研究結(jié)果如下：1采用RTPCR和RACE相結(jié)合的方法，從美花石斛和秋石斛中克隆到光周期途徑的關(guān)鍵基因COL，分別命名為劇7C說(GU301089)和勵C阢(HM211083)。DICOL全長gDNA為1082bp，其中包括一個978bp的開放閱讀框，編碼含有325個

4、氨基酸的蛋白，其DNA序列包含兩個外顯子和一個簡單的一個104bp的內(nèi)含子。DhCOL全長gDNA為1079bp，包括一個981bp的開放閱讀框，編碼含有326個氨基酸的蛋白，其DNA序列包含兩個外顯子和一個98bp的內(nèi)含子。2D1COL和DhCOL含兩個Bbox鋅指結(jié)構(gòu)域和一個CCT結(jié)構(gòu)域。氨基酸序列的同源性分析顯示DICOL和DhCOL與大麥的COL、水稻的Hdl、玉米COL、蝴蝶蘭的COL、擬南芥的AtCOLl和AtCO有較高的同

5、源性，其Bbox結(jié)構(gòu)域和CCT域的保守性更強。美花石斛和秋石斛的氨基酸序列同源性為92％。3采用同源克隆的方法，分別從美花石斛和秋石斛中得到了ACTIN基因eDNA片段，分別命名為刪C丁(GU301090)和D桕C丁(HM211084)。得到的DIACT和DhACTeDNA片段長度均為1059bp。4對美花石斛和秋石斛進行長日照和短日照的光周期誘導(dǎo)，采用RealTimePCR技術(shù)分析DICOL移砒C現(xiàn)在不同光周期模式下的表達情況。實驗結(jié)