23019.擬南芥ppr蛋白ems15功能的初步研究

1、PrelimiCollegeofLifeandEnvironmentalSciences，ShanghaiNormalUniversity，Shanghai，China200234April2011摘要lIiqiillllIIII576擬南芥(ArabidopsisthalJana)白化突變體emsl5經(jīng)EMS化學(xué)誘變法得到。遺傳分析表明該突變株系為核基因控制的單基因隱性突變。突變體的表型為植株白化，苗期致死。葉綠體超微結(jié)構(gòu)分析顯示em

2、sl5突變體的葉綠體空泡化嚴(yán)重，幾乎不含類囊體片層結(jié)構(gòu)。利用圖位克隆和基因測序分析發(fā)現(xiàn)AT4G18520發(fā)生了終止突變，經(jīng)遺傳互補(bǔ)及等位分析確認(rèn)了AT4G18520突變導(dǎo)致了emsl5的白化突變表型。EMSl5基因編碼的蛋白是一個(gè)PPR蛋白家族成員，其蛋白序列中間包含包括P、L、S在內(nèi)的14個(gè)連續(xù)的PPR基序，屬于PLS亞家族。亞細(xì)胞定位顯示該蛋白定位于葉綠體中。序列比對及進(jìn)化分析表明該蛋白在不同物種中均有其同源物，進(jìn)化上比較保守。利用

3、RT—PCR和RealTimePCR分析該基因的表達(dá)模式發(fā)現(xiàn)該基因在根、莖、葉、花和幼苗中均有表達(dá)，而在葉中的表達(dá)量最高。已知多數(shù)PPR蛋白參與對質(zhì)體基因的表達(dá)調(diào)控。為了探究EMSl5基因?qū)θ~綠體基因表達(dá)的影響，我們利用RTPCR分析、EMSl5對葉綠體中前體mRNA內(nèi)含子剪接的影響，結(jié)果顯示部分葉綠體基因如trnK、petB、petD等的內(nèi)含子剪接效率明顯低于野生型。同時(shí)我們也檢測了EMSl5對葉綠體多順反子的切割情況，發(fā)現(xiàn)EMSl5