15419.piggybac轉(zhuǎn)座子大容量轉(zhuǎn)基因及otg1突變導(dǎo)致代謝異常的機(jī)理研究_第1頁
已閱讀1頁,還剩79頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、目錄摘要3Abstract4圖表目錄6第一部分piggyBac轉(zhuǎn)座子大容量轉(zhuǎn)基因研究711背景介紹7111目前轉(zhuǎn)基因研究的局限。7112基因治療簡介9113轉(zhuǎn)基因和基因治療的載體分類12114病毒載體的應(yīng)用與不足13115轉(zhuǎn)座子在轉(zhuǎn)基因和基因治療中的應(yīng)用15116大片段轉(zhuǎn)基因的必要性1812材料與方法19121質(zhì)粒構(gòu)建19122PCR及序列分析19123細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)20124小鼠培養(yǎng)與轉(zhuǎn)基因表達(dá)分析22125統(tǒng)計學(xué)分析23126引物序列2

2、313結(jié)果與分析26131PB[shuttle]及PB[BAC]的構(gòu)建26132PB在人類293細(xì)胞中介導(dǎo)BAC轉(zhuǎn)座。28133PB在小鼠中介導(dǎo)BAC轉(zhuǎn)基因一32134PB介導(dǎo)的BAC轉(zhuǎn)基因在小鼠中表達(dá)的組織特異性3513SPB介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因在小鼠中表達(dá)的位置效應(yīng)分析36136PB[BAC]轉(zhuǎn)基因小鼠中RORv及RORvt的表達(dá)水平分析3814討論與展望。40第二部分Otgl突變導(dǎo)致代謝異常的機(jī)理研究4321背景介紹43211piggyB

3、ac轉(zhuǎn)座系統(tǒng)在小鼠體內(nèi)介導(dǎo)基因插入誘變43212糖代謝平衡及調(diào)控44213激素在血糖調(diào)節(jié)中的作用及分泌461摘要IlUlIIIUIIIIIIIIIIIIY2704835在轉(zhuǎn)基因研究和基因治療中,將每個全長基因準(zhǔn)確的導(dǎo)入哺乳動物和人類基因組中是必需的。然而現(xiàn)有基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)攜帶基因片段的局限性、基因拷貝數(shù)的不可控性和整合位點(diǎn)的不確定性成為在轉(zhuǎn)基因和基因治療中的最大障礙。我們研究發(fā)現(xiàn)改造的piggyBac(船)轉(zhuǎn)座子能有效的將超過200kb的

4、完整大片段基因轉(zhuǎn)移到人類和小鼠細(xì)胞中,以及小鼠體內(nèi)。船介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因使單拷貝的全長基因穩(wěn)定的整合到基因組中,并且轉(zhuǎn)基因按照內(nèi)源性的表達(dá)譜在小鼠體內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)。改造的胎轉(zhuǎn)座子使大片段基因的穩(wěn)定整合和傳遞更加便利,其介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因的表達(dá)受到調(diào)控。大包裝容量可以攜帶基因表達(dá)所需的調(diào)控序列,基因表達(dá)的位置效應(yīng)不明顯。因此,朋轉(zhuǎn)座子可作為一種高效可靠的轉(zhuǎn)基因和基因治療工具,運(yùn)用到對人類基因組功能的研究和基因治療中。糖代謝的精確調(diào)控是機(jī)體執(zhí)行正常生理功能

5、的基本保證。血糖異常增高為主要特征的胰島素抵抗和糖尿病是現(xiàn)代社會面臨的重要健康挑戰(zhàn),而低血糖則會引起眩暈、驚厥等不良反應(yīng),嚴(yán)重時永久損傷腦組織并危及生命。我們在PB轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的大規(guī)模基因插入誘變中獲得了未知功能基因Otgl的突變,發(fā)現(xiàn)該基因編碼的蛋白位于高爾基體等處。突變體出生后出現(xiàn)低血糖、低胰島素、生長遲緩等代謝異常并陸續(xù)死亡,提示Otgl蛋白可能參與了體內(nèi)糖代謝調(diào)節(jié)。本論文進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)Otgl突變體中生長激素及IGF1水平下降,胰

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論