水稻缺鐵上調(diào)基因中與膜泡運輸相關(guān)基因Sec27p、ARHI的克隆、亞細胞定位與功能分析.pdf

1、本論文針對我實驗室前期的基因芯片的研究結(jié)果，對水稻缺鐵脅迫下相對表達量最高——與膜泡運輸相關(guān)的一組基因進行了分析。通過水稻根尖細胞超薄切片的透射電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)細胞質(zhì)膜附近有突起的小泡，且缺鐵處理水稻根尖細胞的小泡比加鐵處理的小泡大，內(nèi)含物更多，同時-Fe處理水稻根尖細胞的小泡呈現(xiàn)向胞內(nèi)、胞外兩個方向發(fā)生，+Fe處理的樣品僅見向胞外發(fā)生的小泡。實驗還對水稻缺鐵脅迫下上調(diào)表達基因中與膜泡運輸?shù)认嚓P(guān)的16個基因進行比對、分析,對其中的ARHI

2、、Sec27p、Tuftelin-interacting、pV72四個基因缺鐵脅迫下上調(diào)表達進行了進一步的鑒定,并通過侵染洋蔥表皮細胞觀察Sec27p-GFP、ARHI-GFP融合蛋白的瞬時表達，對目的基因進行了亞細胞定位，結(jié)果表明Sec27p蛋白定位于細胞質(zhì)中靠近細胞質(zhì)膜附近的小泡上；ARHI蛋白位于細胞核及核周邊膜狀結(jié)構(gòu)上。另外，利用Sec27p、ARHI的轉(zhuǎn)基因煙草，結(jié)合NCBI序列比對及蛋白質(zhì)分析軟件的結(jié)果，對Sec27p、AR