小麥白粉菌RAPD分析及不同白粉菌種間親緣關(guān)系研究.pdf

1、從2003年6月上旬小麥生長(zhǎng)季節(jié)開始,分別在甘肅省中西部張掖市、武威市、蘭州市、定西市等地采集新鮮小麥白粉菌標(biāo)樣,對(duì)小麥白粉病菌進(jìn)行常規(guī)形態(tài)鑒定和分子標(biāo)記,并探討二者之間的關(guān)系,取得了以下幾方面的成績(jī):1.利用小麥苗期離體培養(yǎng),對(duì)從中部高海拔地區(qū)田間采集的小麥白粉病菌進(jìn)行生理小種鑒定及群體毒性頻率分析,結(jié)果:(1)純化菌株36份,鑒定出生理小種20個(gè).其中優(yōu)勢(shì)小種是015,分布頻率為16.7﹪,077號(hào)為次優(yōu)勢(shì)小種.(2)群體毒性分析中

2、毒性基因V<,Era>,V<,8>,V<,1>,V<,3c>,V<,3f>頻率達(dá)70﹪以上,而V<,2,MID>,V<,20>, V<,21>,V<,4b>,V<,4>頻率在16.7﹪以下,46﹪的白粉菌毒性基因頻率高于40﹪,說(shuō)明目前本省中西部的白粉菌毒性基因頻率高,含有Pm<,2+MID>,Pm<,20>,Pm<,21>,Pm<,4b>,Pm<,4>等抗病基因的品種在育種中有一定的利用價(jià)值,也表明地區(qū)間小麥白粉菌群體的毒性結(jié)構(gòu)及毒性

3、頻率存在一定的差異.2.利用RAPD標(biāo)記對(duì)鑒定出的16個(gè)生理小種共20個(gè)菌株進(jìn)行了多樣性分析,結(jié)果表明:(1)從60條10堿基隨機(jī)引物中篩選出能產(chǎn)生穩(wěn)定多態(tài)性標(biāo)記的引物35個(gè),統(tǒng)計(jì)9個(gè)擴(kuò)增結(jié)果比較明顯的隨機(jī)引物擴(kuò)增得到的81個(gè)RAPD位點(diǎn),主要集中在500-2000 bp之間.其中54個(gè)有多態(tài)性,多態(tài)性位點(diǎn)頻率占66.7﹪,而不同引物產(chǎn)生的多態(tài)性片段的比例差別較大,說(shuō)明小麥白粉菌群體中有高度的遺傳分化.同時(shí)也表明RAPD分析可為該菌的群

4、體遺傳研究提供豐富的DNA分子多態(tài)性標(biāo)記.(2)從聚類結(jié)果來(lái)看,武威地區(qū)與其他地區(qū)群體間遺傳距離差異較大,采自海拔較高的祁連山區(qū),田間表現(xiàn)發(fā)病比其他地區(qū)輕,這與毒力分析中毒性頻率低一致;從電泳圖譜上看,代表武威地區(qū)的16號(hào)菌株多態(tài)性高,引物S153擴(kuò)增出一條分子量大約為2.8kb的高分子量帶,與其他條帶差異大,這條高分子帶可能與該生理小種某個(gè)無(wú)毒基因連鎖,需要繼續(xù)深入研究.(3)用PopGene32軟件統(tǒng)計(jì)多態(tài)性頻率為96.3﹪,比單衛(wèi)

5、星(1995)方法統(tǒng)計(jì)的66.7﹪要高的多.SPSS統(tǒng)計(jì)軟件和PopGene32軟件統(tǒng)計(jì)聚類的結(jié)果基本一致,可見(jiàn)在對(duì)小麥白粉菌RAPD結(jié)果分析時(shí),兩種方法都是可行的.3.利用RAPD標(biāo)記對(duì)12種白粉菌之間的親緣關(guān)系進(jìn)行了研究,結(jié)果:(1)5個(gè)擴(kuò)增結(jié)果比較明顯的隨機(jī)引物擴(kuò)增得到的45個(gè)RAPD位點(diǎn)中,有38個(gè)有多態(tài)性,多態(tài)性位點(diǎn)頻率占84﹪,其多態(tài)性明顯要比小麥白粉菌不同菌株間的高.(2)從聚類結(jié)果來(lái)看,得到的親緣關(guān)系結(jié)果與分類地位上的屬