蘋果果皮紅色性狀RAPD分子標記的篩選.pdf

1、本研究采用BSA(BulkedSegregantAnalysis)法結合RAPD(RandomlyAmplifiedPolymorphicDNA)分子標記技術以蘋果三個雜交組合：舞姿×嘎拉、舞姿×短枝富士、舞姿×新紅星的F1雜交群體為試料，尋找蘋果果皮紅色性狀的分子標記。研究結果如下：1.采用改良的CTAB(十六烷基三甲基溴化銨)法，以蘋果休眠芽為試料提取蘋果基因組DNA。DNA質量經(jīng)0.8％瓊脂糖凝膠電泳檢測。結果表明提取的DNA條帶

2、完整、質量高、PCR擴增條帶清晰、條帶數(shù)適中、且重復性好。2.根據(jù)分離群體分組分析法的原理，組成了兩個對比基因池，即紅色池和非紅色池。每個池包含來自舞姿×短枝富士雜交組合的10個F1個體，這10個個體除了在紅色或非紅色果皮色澤上具有差別之外，其它的性狀都是隨機的。篩選了355條10bp隨機引物，共擴增出2783條清晰地DNA帶，平均每條引物擴增7.8條DNA帶。其中有14個隨機引物沒有擴增出產物，占總篩選引物的3.9％。分離群體分組分析

3、初步篩選出49個多態(tài)性引物，通過進一步在群體上進行驗證，最終獲得4個多態(tài)性標記，即S1289、S1235、S2107及S519，它們都能擴增出與紅色性狀相關的標記。S1235、S2107、S519均能在紅色池上和紅色個體上擴增出一條多態(tài)性條帶，而S1289能在非紅色池和非紅色個體上擴增出一條多態(tài)性條帶。估計S1289、S1235、S2107及S519擴增出的多態(tài)性片段的大小分別為：1200bp、1000bp、1200bp及1000bp。

4、它們對F1群體色澤驗證的符合率分別為：73.3％、71.7％、73.3％及71.7％。3.鑒于獲得的多態(tài)性標記對果皮色澤判斷的符合率不高，存在較大誤差的現(xiàn)狀，我們提出了雙引物組合分析的方案。該方案只對雙標記交換類型個體進行淘汰，這樣使得獲得的標記對色澤性狀預測的準確率大幅度提高。群體上的分析表明，每個雙引物組合對色澤判斷的正確率均在90％以上。其中S1289-S2107標記組合可使紅色性狀預測的準確性達到98.3％，對色澤判斷的正確率從

5、單個引物的73.3％提高到98.3％。S2107-S519標記組合可使紅色性狀預測的準確行達到95％，對色澤判斷的正確率從單個引物的73.3％和71.7％提高到95％。4.另外，將獲得的4個多態(tài)性標記在幾個栽培品種上進行了擴增，分析了它們在這些品種上的表現(xiàn)，大多數(shù)品種的表現(xiàn)與理論一致。5.據(jù)Cheng(1996)報道的一個與果實顏色相關的序列，合成了一對通用性引物。并在F1群體及幾個栽培品種上進行了擴增，結果表明該標記F1群體色澤判斷的