桿狀病毒在轉(zhuǎn)P35基因昆蟲(chóng)細(xì)胞系中連續(xù)傳代的研究.pdf

1、河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文桿狀病毒在轉(zhuǎn)P35基因昆蟲(chóng)細(xì)胞系中連續(xù)傳代的研究姓名：陳莉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：農(nóng)業(yè)昆蟲(chóng)與害蟲(chóng)防治指導(dǎo)教師：李國(guó)勛;鄭桂玲20050619S e r i a l p a s s a g e o f B a o n l o r v i r u s i n a t r a u s f e c t e d 1 3 5 g e n e i n s e c t c e l ll i n eP o s t g r a d

2、u a t e ：C h e n L iM a j o r ：A g r i c u l t u r ei n s e c ta n d p e s t c o n t r o lA d v i S O t ：L iG u o x u nT h e r e p l i c a t i o n o f M s N P Va n d A c N P Vi n a M y t h i m n a s e p a r a t e c e l l

3、 l i n e ，N E A v - M s 一7 3 1 1a n d at r a n s f e c t e d g e n e M y t h i m n a s e p a r a t e c e l ll i n e ．T M s F , i sp r e s e n t e d ．n e r e s u l ts h o w e dt h a tT M s F c e l l sw a sh i g h l ys u s

4、 c e p t i b l et OA c N P V w i t h7 4 ％o ft h ei n f e c t i o n r a t e sp o s t i n f e c t i o n ．15c l o n e sw e l “ eo b t a i n e db yc e l lc l o n i n g ．A f t e rs e v e r a lp a s s a g e s ．1 lc l o n e so

5、ft h e mw e r e s e l e c t e da n d n a m e d a s C T - 1 、C T - 2 ?C T - 1 1 ．T h e y w e r e e x a m i n e d f o r t h e i r r e s i s t a n c et on u t r i t i o n a ls t r e s si nP B S a n d i n f e c t i o no f A

6、c N P V ．C T ．7a n d C T - 8 c l o n e s w h i c h a p p e a r e ds t r o n g r e s i s t a n c e t O P B Sa n d h i g h p r o d u c t s o fO B sw e r e o b t a i n e d ．A c N P VW a ss u b s e q u e n t l yg r o w n i n

7、t h e s ec e l ll i n e sf o r1 0s e r i a lp a s s a g e ，r e s u l ts h o w e di n f e c t i v i t ya n dO B y i e l d sd r o p p e d o f f r a p i d l y i nC T - 8 a n d T M s F c d l l i n e sa n d d i d n o t i nC T

8、 - 7 ．T h em o r p h o l o g yo fC T - 7 。g r o w ni nG r a c em e d i u m ，g e n e r a l l yc o n s i s t e do fs p i n d l ec e l l sw i m p r e s e n c eo f s o m e r o u n d c e i l s ．T h eC T - 7c e l ll i n er e a

9、 c h e d m a x i m u m d e n s i t y o f 9×1 0 ’c e l l s ／m la tf i v ed a y sa n dt h ep o p u l a t i o nd o u b l i n gt i m ei s3 7 ．1 h ．W i l d —t y p eA c N P V( M O I ：1 0 ) i n f e c t e d t h e C T - 7 c

10、e l l s 訊t } la ni n f e c t i o no f 8 0 ．5 ％o f t h e c e l l sa n d t h e p r o d u c t i o no f o c c l u s i o nb o d i e s ( O B s ) b y i tw a s h i g h ，h i g h t e s to f 6 6 ．4O B s ／c e l l ．B u d d e d v i r

11、u st i t e rr e a c h e dam a x i m u m t i t e ra tt h et h i r dp a s s a g ea tt h es a l n et i m ei nt w o l i n e s ．T } l eC T - 7 c e l ll i n e r e a c h e dm a x i m u m t i t e ro f3 ×1 0 6 T c m 5 0 ，I n

12、 l a n d d i d n o t d r o po f f o b v i o u s l y i nl a t e rp a s s a g e ．I tw a s h i g h e r t h a ni nT M s F c e l lf i n e ．B u t t h ec h a n g t r e n do fb u d d e dv i r u st i t e r d e s c e n d e do b v

13、i o u s l yf r o m 2 ．7 ×1 0 7 T C E 0 5 ( C m lt o 1 ．4 ×1 0 0T C I D s d m li nT M s F c e l ll i n e ．C T _ 7c e l l ss h o w e dh i g hr e s i s t a n c et On u t r i e n ts t r e s si nc o m p a r i s o nw

14、 i t hp a r e n t a lc e l ll i n eT M s F w h e n c e l l sw e r e e x p o s e dt OP B S ．C e l lv i a b i l i t yw a s8 6 ％w i t h C T - 7a f t e ro n ed a y i nP B S ．F o u r d a y sl a t e r , 6 ％C T - 7c e l l sw e

15、r es u r v i v e db u tT M s F c e l ll i n ed i e dw i t h i nt w o d a y s ．B i o a s s a y W a s p e r f o r m e d u s i n gO B s g e n e r a t e d f r o m d i f f e r e n t v i r a lp a s s a g e t oe x a m i n et h

16、e r e l a t i o n s h i pb e t w e e n m o r t a l i t ya n d p a s s a g e n u m b e r ．C T - 7c e l l ss h o w e dh i g h e r m o r i l i t yf o rS p o d o p t e r ae x i g u al a r v a ea n dc h a n g e ds m o o t h l

17、 yf r o m4 7 ％- 6 3 ％．B u t ’n 訂s Fc e l ll i n eW a s o p p o s i t e ．A c N P V W a s r e p l i c a t e di nC T - 7c e l l sf o r1 0p a s s a g e sc o n t i n u o u s l ya n d t h e r ew a s n os i g n i f i c a n tc h