人類不同原核數(shù)目受精卵中篩選正常優(yōu)質(zhì)胚胎的策略研究.pdf

1、第一章：目的：通過對正常原核數(shù)目的受精卵進行原核評級，在體外受精-胚胎移植治療中篩選正常優(yōu)質(zhì)胚胎。
　　 方法：回顧性分析本院2003年5月-2003年12月，采用聯(lián)合評級篩選胚胎進行移植的434個周期，共2714個正常原核數(shù)目受精卵。根據(jù)受精卵原核發(fā)育是否同步，分為原核發(fā)育同步組和原核發(fā)育不同步組，觀察不同原核等級受精卵的發(fā)育潛力。移植胚胎的選擇首先根據(jù)胚胎發(fā)育速度及形態(tài)評級，其次根據(jù)原核評級時的等級。根據(jù)移植胚胎中是否含有原

2、核發(fā)育同步組的胚胎，統(tǒng)計比較妊娠率和著床率。
　　 結(jié)果：在2714個正常原核數(shù)目受精卵中，原核發(fā)育同步的受精卵1774個，其中優(yōu)質(zhì)胚胎(≥6細胞，形態(tài)評級為Ⅰ級或Ⅱ級)743個，優(yōu)質(zhì)胚胎率為41.9％；原核發(fā)育不同步的受精卵940個，其中優(yōu)質(zhì)胚胎319個，優(yōu)質(zhì)胚胎率為34.0％，兩組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。有395個周期的移植胚胎中含有原核發(fā)育同步組的胚胎，妊娠率為47.9％(189/395)，著床率為27.

3、5％(273/993)；有39個周期的移植胚胎中無原核發(fā)育同步的胚胎，妊娠率為43.6％(17/39)，著床率為25.0％(21/84)。兩組比較，差異無統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論：原核評級可以有效的預測胚胎的發(fā)育潛力和質(zhì)量，有助于從正常原核數(shù)目受精卵中篩選正常優(yōu)質(zhì)胚胎。然而，在聯(lián)合評級時，參考原核評級并不能獲得更高的妊娠率和著床率。
　　 第二章：目的：比較來源于人類單原核受精卵的發(fā)育停滯胚胎、囊胚及人類胚胎干細胞系之間

4、的核型構(gòu)成，尋求是否能夠通過囊胚培養(yǎng)可靠地篩選出單原核受精卵來源的正常核型胚胎。
　　 方法：對單原核受精卵進行5天的囊胚培養(yǎng)，然后使用18號、X和Y染色體熒光探針對獲得的囊胚以及發(fā)育停滯的胚胎進行熒光原位雜交分析；單原核受精卵來源的人類胚胎干細胞系通過G顯帶技術(shù)進行核型分析。
　　 結(jié)果：囊胚的二倍體率(74.6％)顯著高于(P<0.001)發(fā)育停滯胚胎的二倍體率(31.6％)，人類胚胎干細胞系的二倍體率(97.0％)

5、則顯著高于(P<0.01)囊胚的二倍體率；通過囊胚培養(yǎng)可以淘汰單倍體異常核型的胚胎，然而單原核受精卵來源的囊胚中仍存在著嵌合體和單體等異常核型，單原核受精卵來源的人類胚胎干細胞系中存在三體異常核型。
　　 結(jié)論：通過對單原核受精卵進行囊胚培養(yǎng)可以有效的篩選出正常核型的優(yōu)質(zhì)胚胎；并有效的淘汰異常核型胚胎，尤其是單倍體異常核型胚胎。不過囊胚培養(yǎng)并不能可靠的淘汰嵌合體和非整倍體等異常核型。
　　 第三章：目的：分析比較去除多余

6、原核后三原核受精卵來源胚胎和完整三原核受精卵來源胚胎的核型構(gòu)成，檢驗能否通過結(jié)合去除多余原核和囊胚培養(yǎng)可靠的篩選出三原核受精卵來源的恢復正常核型的胚胎。并嘗試利用去除多余原核后三原核受精卵來源的囊胚建立人類胚胎干細胞系。
　　 方法：實驗組中的三原核受精卵通過顯微操作去除多余原核后進行5—6天的囊胚培養(yǎng)；未去除多余原核的三原核受精卵行囊胚培養(yǎng)作為對照組。用17號、X和Y染色體探針對兩組的胚胎進行熒光原位雜交分析核型。實驗組中囊胚

7、的內(nèi)細胞團用于胚胎干細胞建系，對建立的細胞系進行干細胞特性鑒定。使用G顯帶方法進行核型分析，并通過DNA指紋分析干細胞的染色體組是否遺傳自雙親。
　　 結(jié)果：實驗組的囊胚形成率為13.5％，顯著高于(P<0.05)對照組的囊胚形成率(8.7％)。實驗組胚胎的三倍體率(5.7％)顯著低于(P<0.01)對照組的三倍體率(19.4％)。實驗組囊胚的二倍體率(55.0％)顯著高于(P<0.05)實驗組發(fā)育阻滯胚胎的二倍體率(18.4％