大鼠無肝狀態(tài)下七氟醚代謝相關(guān)藥酶CYP2E1表達變化的研究.pdf

1、研究背景：
　　 七氟醚以其獨特的優(yōu)勢目前已較廣泛地應(yīng)用于臨床麻醉的多個領(lǐng)域,而且因其不增加患兒的躁動和非適應(yīng)性的行為改變,特別適用于小兒麻醉。近年來對七氟醚代謝酶及其在體內(nèi)多種代謝途徑的研究,使得人們對于七氟醚在體內(nèi)的代謝機制有了更深入的了解,七氟醚在體內(nèi)的代謝主要是由肝臟微粒體內(nèi)的CYP2E1來催化完成的,所以CYP2E1表達量以及活性的任何改變,都將影響到七氟醚的體內(nèi)代謝,據(jù)此推測可用CYP2E1的表達量變化來檢測七氟醚的

2、體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化程度,使定位七氟醚的肝外代謝器官成為可能。其它一些吸入麻醉劑除主要在肝臟中進行代謝外,還可在腎臟和肺臟等肝外組織中進行代謝,CYP2E1肝外器官組織的表達提示七氟醚也存在肝外代謝,這對于機體在肝移植無肝期減低七氟醚的可能損害尤為重要。應(yīng)用動物模型研究各種吸入麻醉藥的體內(nèi)代謝,為探索人體內(nèi)CYP2E1對七氟醚的代謝機制提供了一種有效途徑,對進一步研究肝臟移植的無肝階段,吸入式麻醉劑七氟醚的藥代動力學具有十分重要的意義。

3、　　 目的：
　　 本實驗以大鼠為動物模型,小腸、肺臟和腎臟組織為研究對象,解剖分離并阻斷肝門,模擬臨床肝移植手術(shù)中無肝期階段,通過免疫組化、RT-PCR和Westrn-blot三種方法觀察CYP2E1酶的基因、蛋白的表達和變化,為探討七氟醚在無肝狀態(tài)下的代謝途徑及作用機制提供依據(jù)。
　　 材料和方法
　　 實驗分為兩部分:
　　 1、肝門阻斷后用免疫組織化學法檢測七氟醚代謝相關(guān)CYP2E1酶在肝外小腸

4、、肺臟和腎臟組織的表達。
　　 將SD大鼠隨機分為三組,對照組(A)、無肝期30分鐘(B)和無肝期60分鐘(C),n=8,各組均吸入七氟醚麻醉,B和C組通過阻斷肝門模擬肝移植無肝期,相應(yīng)時間終點截取各組大鼠小腸、肺臟和腎臟組織,應(yīng)用免疫組織化學法檢測七氟醚代謝相關(guān)藥酶CYP2E1在其中的表達。
　　 2、制作肝外組織勻漿,RT-PCR和Western blot法分別檢測肝門阻斷后七氟醚代謝相關(guān)CYP2E1酶在小腸、肺臟和

5、腎臟組織的基因mRNA和蛋白質(zhì)的表達變化。
　　 將SD大鼠隨機分為三組,對照組(A)、無肝期30分鐘(B)和無肝期60分鐘(C),n=6,各組均吸入七氟醚麻醉,B和C組通過阻斷肝門模擬肝移植無肝期,相應(yīng)時間終點截取各組大鼠小腸、肺臟和腎臟組織,制作組織勻漿,應(yīng)用RT-PCR、Western Blot檢測七氟醚代謝相關(guān)藥酶CYP2E1在其中的表達。
　　 結(jié)果：
　　 1、CYP2E1免疫組織化學法檢測,肝外肺臟

6、組織中CYP2E1陽性表達在B組和C組顯著多于A組(P＜0.05),B組和C組相比無顯著差異(P＞0.05),圖片顯示CYP2E1在肺臟組織的多種細胞中表達,在腎臟和小腸的單一細胞中表達。
　　 2、RT-PCR、Western Blot檢測顯示肝外肺臟組織中CYP2E1的表達在B組和C組顯著強于A組(P＜0.05),B組和C組相比無顯著差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 大鼠無肝狀態(tài)下,CYP2E1在肝