實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Beagle犬微衛(wèi)星研究及線粒體DNA全序列測(cè)定分析.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Beagle犬微衛(wèi)星研究及線粒體DNA全序列測(cè)定分析姓名：徐其放申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：動(dòng)物學(xué)指導(dǎo)教師：常弘20050607本研究所選取的微衛(wèi)星位點(diǎn)在所有個(gè)體上都得到了很好的表現(xiàn)，表現(xiàn)了較好的多態(tài)性。在其巾一個(gè)研究座位卜共發(fā)現(xiàn)6個(gè)復(fù)等位基因。美國(guó)進(jìn)口犬群體共有6個(gè)等位基因片斷，廣州白養(yǎng)犬群體其有5個(gè)等位基因片斷。計(jì)算結(jié)果表明兩群體的雜合度、PIC值均較高(分別為07876，07515和07010，06747，

2、)，基凼分化系數(shù)很低(0021)，表明兩群體沒(méi)有形成明顯的獨(dú)立群。最后借助PCR測(cè)序技術(shù)得到了該微]j星位點(diǎn)DNA序列，為研究其群體的微衛(wèi)星多態(tài)性提供依據(jù)，可作為在分子水平上對(duì)Beagle犬進(jìn)行榆測(cè)手段。通過(guò)測(cè)序得到Beagle犬線粒體全基因組序列(16，756bp)，該序列與家犬有996％的相似性，且已被GenBank收錄(編號(hào)：AY729880)，由于在控制區(qū)中有不同數(shù)量的重復(fù)片段，該總長(zhǎng)度并不一定。借助生物軟件，分析了基因組結(jié)構(gòu)、

3、組成以及密碼子使用，L一鏈堿基組成為：A，3161％：c，2550％：G，1417％：T，2872％：AT，6033％：GC，3967％。最常用起始密碼子為ATG，有十個(gè)基因使用。同時(shí)對(duì)全序列所編碼的基因進(jìn)行了定位：包括22個(gè)tRNA基因、2個(gè)rRNA基因、l3個(gè)編碼蛋白基因和一個(gè)控制區(qū)。最后進(jìn)行了限制性內(nèi)切酶圖譜的初步研究。通過(guò)設(shè)計(jì)PCR引物進(jìn)行擴(kuò)增，得到了Beagle犬線粒體DNA控制區(qū)的全序列(1292bp)。雖然，線粒體控制區(qū)不

4、具有編碼功能，但是研究發(fā)現(xiàn)：該區(qū)對(duì)于線粒體基因組復(fù)制、表達(dá)起著關(guān)鍵作用，因?yàn)橛泻芏嗾{(diào)控元件都定位在此區(qū)，如：末端終止序列，中央?yún)^(qū)域，重復(fù)序列，保守區(qū)，重鏈復(fù)制啟始區(qū)，重鏈轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)區(qū)，輕鏈轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)區(qū)，而且，這些元件都具有自己特征性堿基序列，有助于識(shí)別它們的核苷酸序列。同時(shí)，通過(guò)檢索EMBL數(shù)據(jù)庫(kù)，本研究分析了幾種不同目動(dòng)物線粒體DNA控制區(qū)中存在的重復(fù)序列，結(jié)果發(fā)現(xiàn)幾乎每個(gè)目有自己不同的重復(fù)序列，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明：犬科動(dòng)物線粒體DNA控制區(qū)