一個(gè)新的人類睪丸特異性基因—TDRG1的cDNA克隆及表達(dá)分析.pdf

1、新基因的表達(dá)譜分析是一個(gè)重要的推測(cè)新基因功能的手段。研究基因表達(dá)與否、何時(shí)表達(dá)、在什么部位表達(dá)能為新基因的功能研究提供有用的線索。 1 TDRG/基因在人睪丸組織不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)分析 在證實(shí)了TDRGI基因具有睪丸組織特異性的基礎(chǔ)上，本部分首先運(yùn)用半定量RT-PCR技術(shù)研究了TDRG1基因在人睪丸組織不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)特征，結(jié)果發(fā)現(xiàn)．TDRG1基因在時(shí)空表達(dá)上具有發(fā)育階段特異性，即在正常胚胎睪丸組織中不表達(dá)，至成年期睪

2、丸組織中開始啟動(dòng)該基因的表達(dá)，在成年期該基因表達(dá)最強(qiáng)，而在老年睪丸組織中表達(dá)明顯減弱。 許多在睪丸中表達(dá)的基因經(jīng)常具有細(xì)胞類型特異性或發(fā)育階段特異性，反映了組織在發(fā)育過程中的需求。睪丸不同發(fā)育階段差異表達(dá)的基因在某種意義上與睪丸發(fā)育特別是精子發(fā)生過程密切相關(guān)。TDRG1 mRNA在睪丸組織中的表達(dá)模式具有明顯的發(fā)育階段特異性，提示該基因在睪丸生殖細(xì)胞的發(fā)育過程中扮演重要角色，可能參與精子生成的過程。 2 TDRG1基因在

3、睪丸組織生殖細(xì)胞中的表達(dá)分析 為了進(jìn)一步明確TDRG1基因在睪丸組織生殖細(xì)胞中的表達(dá)特點(diǎn)及其可能的功能作用，采用經(jīng)地高辛標(biāo)記的TDRG1 mRNA特異的多聚寡核苷酸探針，與人類睪丸組織進(jìn)行原位雜交。發(fā)現(xiàn)TDRG1 mRNA在精母細(xì)胞及精細(xì)胞中有明顯表達(dá)，而在支持細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞中無(wú)表達(dá)，具有明顯的生精細(xì)胞特異性。隱睪癥患者睪丸組織中TDRG1 mRNA的表達(dá)缺失。 精子生成包括連續(xù)的有絲分裂、減數(shù)分裂和減數(shù)分裂后階段。其中

4、精原細(xì)胞處于減數(shù)分裂前階段，精母細(xì)胞處于減數(shù)分裂開始階段，而精細(xì)胞處于減數(shù)分裂后階段。TDRG1 mRNA在人睪丸曲細(xì)精管中生精細(xì)胞特異性表達(dá)的特點(diǎn)表明，該基因在精子生成的不同階段存在差異表達(dá)，它可能參與控制男性正常精子形成的開始階段，并在減數(shù)分裂后期精子的發(fā)育過程中起作用。 小結(jié)：本研究運(yùn)用數(shù)據(jù)庫(kù)消減雜交方法這一新策略結(jié)合實(shí)驗(yàn)手段成功克隆了一個(gè)人類睪丸生精細(xì)胞相關(guān)的新基因TDRG1，并采用Northernblot、半定量RT-