樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)的抗腺樣囊性癌免疫預(yù)防裸鼠移植瘤發(fā)生并抑制其生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：利用人體外周血來(lái)源的樹突狀細(xì)胞(dendriticcells，DCs)強(qiáng)大的抗原提呈能力和激活T細(xì)胞尤其是初始型T細(xì)胞的能力，用腺樣囊性癌細(xì)胞系總RNA轉(zhuǎn)染DC制成一種治療性疫苗，觀察這種疫苗在裸鼠體內(nèi)誘導(dǎo)腫瘤患者抗原特異性抗瘤免疫的能力。 方法：采集腺樣囊性癌患者外周單核細(xì)胞，用貼壁方法分離單核細(xì)胞。貼壁的單核細(xì)胞加rhIL-4和rhGM-CSF常規(guī)條件下培養(yǎng)7天獲得未成熟DC，觀察DC形態(tài)，流式細(xì)胞儀確認(rèn)DC的表面標(biāo)志

2、。從腺樣囊性癌細(xì)胞系提取總RNA后轉(zhuǎn)染DC。流式細(xì)胞儀測(cè)定轉(zhuǎn)染前后DC的表面標(biāo)志的變化。轉(zhuǎn)染后的DC與自體T淋巴細(xì)胞混合，誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞成為抗原特異性CTL。流式細(xì)胞儀分析刺激前后T淋巴細(xì)胞成分變化。 建立裸鼠腺樣囊性癌移植瘤模型，以DC激活的CTL預(yù)防性接種于裸鼠皮下，觀察隨后接種的腺樣囊性癌細(xì)胞系移植瘤發(fā)生率。觀察接種于裸鼠的腺樣囊性癌細(xì)胞系移植瘤生長(zhǎng)。 結(jié)果：提取腺樣囊性癌細(xì)胞系總RNA后，電泳顯示完整未降解。光學(xué)

3、顯微鏡下單核細(xì)胞來(lái)源的DC有樹枝狀突起的典型形態(tài)。流式細(xì)胞儀分析顯示不加TNF-a培養(yǎng)的DC特征性表面標(biāo)志均未達(dá)到成熟，符合轉(zhuǎn)染用DC的要求。轉(zhuǎn)染腺樣囊性癌細(xì)胞系總RNA后，DC特征性表面標(biāo)志CD1a及遞呈相關(guān)表面標(biāo)志CD86表達(dá)上調(diào)，DC向成熟DC方向發(fā)展，間接說(shuō)明了RNA在DC中得到了表達(dá)。DC刺激自體淋巴細(xì)胞5天后，CD8+T細(xì)胞比例上升。預(yù)防組接種腺樣囊性癌細(xì)胞后20天內(nèi)，9只裸鼠中僅2只有移植瘤發(fā)生，而對(duì)照組27只均有移植瘤發(fā)

4、生。接種后37天對(duì)照組、治療組腫瘤大小分別為1293±170mm2和669±100mm2(P＜0.05)。 結(jié)論：腺樣囊性癌細(xì)胞系總RNA轉(zhuǎn)染腺樣囊性癌患者外周單核細(xì)胞來(lái)源的DC后，可促進(jìn)DC成熟，并有效刺激T淋巴細(xì)胞增殖分化為具有殺傷能力的抗原特異性CTL，這種CTL不僅能預(yù)防腺樣囊性癌裸鼠移植瘤的發(fā)生，而且能抑制該移植瘤的發(fā)展。提示腺樣囊性癌細(xì)胞總RNA轉(zhuǎn)染DC在裸鼠實(shí)驗(yàn)中是一種有效的治療性疫苗，可誘導(dǎo)特異性抗瘤免疫殺傷腫瘤