Th極化關(guān)鍵基因TBX21和TIM-1與甲-乙型肝炎及自身免疫性肝炎的遺傳關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、研究背景：我國(guó)肝病臨床資源豐富。與西方國(guó)家以脂肪肝、酒精性肝炎、丙型肝炎、藥物性肝炎和自身免疫性肝病為主的慢性肝病譜不同，慢性乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染相關(guān)慢性肝病(慢性乙型肝炎、肝硬化、原發(fā)性肝癌)一直是我國(guó)主要的肝病類型。同時(shí)，丙型、甲型、戊型肝炎病毒感染也不容忽視，病毒性肝炎成為我國(guó)的優(yōu)勢(shì)疾病資源。同時(shí)，隨著診斷方法和重視程度的提高，自身免疫性肝病的就診率和診斷率不斷上升。自身免疫疾病存在顯著的種族

2、差異(發(fā)病率、臨床表現(xiàn))，如中國(guó)人群自身免疫性肝病合并其他系統(tǒng)自身免疫疾病者少見(jiàn)，我國(guó)自身免疫性肝病的臨床特點(diǎn)及遺傳易感性尚未得到充分的研究。 鑒定病毒性肝炎和自身免疫性肝炎的遺傳因素是一個(gè)重要同時(shí)又具有挑戰(zhàn)性的問(wèn)題，目前的認(rèn)識(shí)并不充分。對(duì)于病毒性肝炎和自身免疫性肝炎這類常見(jiàn)復(fù)雜疾病，基于病例.對(duì)照設(shè)計(jì)的遺傳關(guān)聯(lián)研究的廣泛使用，通常根據(jù)生物學(xué)功能選擇候選基因進(jìn)行遺傳變異與疾病關(guān)聯(lián)的檢測(cè)。T輔助細(xì)胞(Th)極化在病毒性肝炎和自身免

3、疫性肝炎的病理生理過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵的作用。近年的研究表明T-bet(由TBX21基因編碼)和TIM-1分子是Th細(xì)胞極化的關(guān)鍵分子，在病毒感染及自身免疫疾病發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮著極其重要的作用。 T-bet屬于T-box轉(zhuǎn)錄因子家族，是調(diào)節(jié)Th細(xì)胞分化的T細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子，也是CD8+初始T細(xì)胞分化為CTL的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。T細(xì)胞T-bet蛋白水平的下降與機(jī)體對(duì)一些病毒感染的反應(yīng)性降低有關(guān)，例如HIV感染以及土撥鼠肝炎病毒(woodch

4、uckhepatitisvirus，WHV)感染；而T細(xì)胞T-bet蛋白水平的升高與炎癥反應(yīng)的結(jié)局相關(guān)，例如Th1介導(dǎo)的腸炎及肝損傷。人類T-bet蛋白由TBX21基因編碼，其常見(jiàn)單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphism，SNP)位點(diǎn)位于啟動(dòng)子區(qū)。T-1993C位點(diǎn)變異影響TBX21基因的轉(zhuǎn)錄活性。 T細(xì)胞表面免疫球蛋白-黏蛋白樣結(jié)構(gòu)蛋白1(Tcellimmunoglobindomainandmu

5、cindomainprotein1，TIM-1)是一種膜表面糖蛋白，表達(dá)于CD4+T輔助細(xì)胞表面，影響CD4+T輔助細(xì)胞發(fā)生Th1/Th2極化的關(guān)鍵時(shí)期。其在活化的Th2細(xì)胞表面高表達(dá)，作為共刺激分子，誘導(dǎo)Th2活化增殖。與此同時(shí)TIM-1也是目前已知的甲型肝炎病毒進(jìn)入細(xì)胞的唯一受體。人群中TIM-1基因存在多態(tài)性，其外顯子4編碼的粘蛋白結(jié)構(gòu)域存在插入缺失變異。 目的：TBX21和TIM-1基因遺傳變異與病毒性肝炎和自身免疫性肝

6、炎的關(guān)系值得探討。本研究基于醫(yī)院和社區(qū)收集病例對(duì)照，采用生物學(xué)功能候選基因一遺傳關(guān)聯(lián)策略，進(jìn)行Th細(xì)胞極化關(guān)鍵基因TBX21和TIM-1與乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染、甲型肝炎病毒(hepatitisAvirus，HAV)感染和自身免疫性肝炎的遺傳關(guān)聯(lián)研究。 方法：主要研究工作有： 1.在本單位以前的樣本庫(kù)基礎(chǔ)上，新收集到1758份人群樣本，其中包括男性1241人，女性517人，涵蓋了正常對(duì)

7、照人群、慢性HBV感染者/自限性清除者、甲型肝炎顯性感染患者、隱性感染者、HAV標(biāo)志物全陰性者以及自身免疫性肝炎患者等臨床分組，成功提取DNA。完成新收集到的1758份樣本相關(guān)病史資料查閱和資料的錄入，并對(duì)我所前期工作中收集到的4700余例病人病史資料進(jìn)行完善。對(duì)上述病史資料進(jìn)行整理，剔除重復(fù)，獲得包括完整病史資料、血DNA和血清的樣本4181人份，完成了DNA提取及Panel制作。 2.對(duì)dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)及文獻(xiàn)報(bào)道的TBX21

8、基因的8個(gè)SNP位點(diǎn)，T-1993C、T-1514C、G-1499A、C99G、T1298C、G6547A、T7725C、T9903C，在我們的代表性樣本中進(jìn)行了測(cè)序驗(yàn)證及分型方法探索。 3.對(duì)TIM-1基因外顯子4多態(tài)性進(jìn)行了克隆-測(cè)序發(fā)掘，構(gòu)建了單倍型，并摸索了157MVTTTP插入缺失多態(tài)性的GeneScan分型方法。 4.選擇了TBX21基因T-1993C和TIM-1基因157MVTTTP插入缺失多態(tài)位點(diǎn)，對(duì)正常

9、對(duì)照人群、慢性HBV感染者/自限性清除者、甲型肝炎顯性感染患者、隱性感染者、HAV標(biāo)志物全陰性者以及自身免疫性肝炎患者進(jìn)行了基因分型及疾病關(guān)聯(lián)分析。 結(jié)果：主要研究結(jié)果有： 1.重慶人群中，TBX21基因外顯子區(qū)和啟動(dòng)子區(qū)的最高頻多態(tài)位點(diǎn)是T-1993C，國(guó)外報(bào)道的G-1499A和T9903C位點(diǎn)頻率極低(等位頻率＜1％)。 2.重慶人群中，TIM-1基因外顯子4有高度多態(tài)性，主要單倍型有4種。 3.以無(wú)

10、癥狀攜帶者為對(duì)照，TBX21基因T-1993C位點(diǎn)與慢性HBV感染疾病進(jìn)程無(wú)顯著關(guān)聯(lián)。以隱性感染者為對(duì)照，TBX21基因T-1993C位點(diǎn)與HAV感染疾病狀態(tài)無(wú)顯著關(guān)聯(lián)。 4.以慢性HBV感染者為對(duì)照，TBX21基因T-1993C位點(diǎn)與HBV自限性清除存在顯著的關(guān)聯(lián)(x2=20.4，P=0.0000063);啟動(dòng)子區(qū)單倍型.1993T-1514T顯著降低慢性HBV感染的風(fēng)險(xiǎn)(P=0.000017，OR=0.46，95％CI0.3

11、2～0.65)。 5.以獻(xiàn)血員為對(duì)照，TBX21基因T-1993C位點(diǎn)與自身免疫性肝炎存在顯著關(guān)聯(lián)，-1993T等位與自身免疫性肝炎顯著相關(guān)(x2=13.7，P=0.00004)。多因素Logistic回歸校正年齡、性別等因素，-1993T/T純合子發(fā)生自身免疫性肝炎的風(fēng)險(xiǎn)度顯著升高(P=0.00043,OR=0.26，95％CI=0.12～0.55)。 6.TIM-1基因157MVTTTP插入缺失多態(tài)位點(diǎn)對(duì)HBV感染、

12、HAv感染和自身免疫性肝炎的遺傳風(fēng)險(xiǎn)度沒(méi)有顯著影響。 結(jié)論：我們基于醫(yī)院的病例對(duì)照研究結(jié)果表明，TBX21基因T-1993C位點(diǎn)與HBV自限性清除及自身免疫性肝炎相關(guān)聯(lián)。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，疾病關(guān)聯(lián)的T-1993C位點(diǎn)是TBX21基因啟動(dòng)子的潛在調(diào)節(jié)性SNP位點(diǎn)，其遺傳變異影響TBX21基因的轉(zhuǎn)錄活性，-1993C等位的轉(zhuǎn)錄活性較強(qiáng)。有關(guān)TBX21基因T-1993C位點(diǎn)與HBV自限性清除及自身免疫性肝炎的遺傳關(guān)聯(lián)及機(jī)制，值得進(jìn)一步深入