水楊酸鈉對大鼠螺旋神經(jīng)節(jié)細胞外向整流鉀電流及其尾電流的影響.pdf

1、第一部分短時血清培養(yǎng)與多聚賴氨酸對耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細胞活性與貼附性的作用 目的：體外分離大鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細胞(Spiral Ganglion Neurons，SGN)，探索急性分離后短時血清培養(yǎng)可提高耳蝸SGN的活性，同時觀察多聚賴氨酸對耳蝸SGN的貼附性影響，為采取膜片鉗技術(shù)研究耳蝸SGN 電生理特性提供實驗平臺。 方法：采用急性分離的方法獲得耳蝸SGN 后，進行短時間的血清培養(yǎng)，同時在培養(yǎng)皿的底部加入多聚賴氨酸。分別

2、比較耳蝸SGN 在活性和貼附性上與未進行血清培養(yǎng)及未加多聚賴氨酸時的差異。 結(jié)果：1．急性分離后的耳蝸SGN，短時血清培養(yǎng)后比不培養(yǎng)的能獲得更好的細胞狀態(tài)，可以記錄出穩(wěn)定的電流曲線，并且能持續(xù)良好的細胞活性約5 小時,而不加血清培養(yǎng)的細胞,良好活性只能持續(xù)約半小時。2．在培養(yǎng)皿底加用多聚賴氨酸，可明顯提高耳蝸SGN的貼附性。 結(jié)論：急性分離方法得到的耳蝸SGN，通過加血清短時培養(yǎng)及在培養(yǎng)皿底加多聚賴氨酸，可明顯提高耳蝸S

3、GN的活性及貼附性，增加了細胞的記錄時間和封接成功率。從而有利對耳蝸SGN 做進一步電生理學(xué)的研究。 第二部分水楊酸鈉對大鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細胞外向延遲整流鉀電流及其尾電流的影響 目的：記錄水楊酸鈉作用下，急性分離新生大鼠耳蝸SGN 延遲整流鉀通道電流及其尾電流的電流曲線。分析水楊酸鈉(Sodium Salicylate)對耳蝸SGN 鉀電流及其尾電流的影響，并初步探討其耳毒性機制。 方法：采用全細胞膜片鉗技術(shù)記錄

4、耳蝸SGN 外向延遲整流鉀電流及其尾電流曲線。同時記錄水楊酸鈉作用下，此二電流的變化。 結(jié)果：Protocol 設(shè)置鉗制電壓為-60mV，刺激電壓從-80 mV～﹢60mV 逐漸去極化，階躍電壓為﹢10 mV，持續(xù)時間為500ms。可在耳蝸SGN 上記錄到外向整流鉀電流，該電流對4-AP 敏感，具有延遲整流特性；在細胞外液中加入1mmol/L 水楊酸鈉，能明顯抑制耳蝸SGN 延遲整流鉀電流。﹢50mV的去極化電壓刺激后引出的最大

5、穩(wěn)態(tài)電流幅值減少了46.3±2％；水楊酸鈉對此電流的抑制作用與細胞外液中水楊酸鈉的濃度呈劑量呈正相關(guān)，即水楊酸鈉濃度越大，對電流的抑制作用越大；外液洗脫后耳蝸SGN外向延遲整流鉀電流可基本恢復(fù)正常。另外，將Protocol 設(shè)置為先加預(yù)刺激-65mV～﹢40mV,緊接給予去極化刺激，-40mV～﹢80mV，可記錄出延遲整流鉀電流后的尾電流曲線。加用水楊酸鈉作用后，水楊酸鈉可降低尾電流峰值，并加速尾電流的失活。 結(jié)論：水楊酸鈉可抑