線粒體能量依賴的蛋白酶LON下調(diào)對(duì)腫瘤細(xì)胞特性影響的研究.pdf

1、線粒體中的絲氨酸蛋白酶LON/PIM1執(zhí)行管家功能和調(diào)節(jié)功能；在高溫、缺氧、損傷等應(yīng)激情況下，LON蛋白酶對(duì)細(xì)胞的凋亡調(diào)控起著重要的作用。 本研究嘗試使用RNAi的方法來減少腫瘤細(xì)胞線粒體中絲氨酸蛋白酶LON的表達(dá)。應(yīng)用RT-PCR方法篩選了乳腺癌MCF-7細(xì)胞等8種具有代表性的腫瘤細(xì)胞系，結(jié)果顯示乳腺癌MCF-7細(xì)胞中LON基因的表達(dá)量較高，因此被選為研究LON基因RNA干涉的靶細(xì)胞。設(shè)計(jì)針對(duì)LON基因的siRNA并連入pSi

2、lencer2.1載體構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pSilencer-LON，經(jīng)瞬時(shí)與穩(wěn)定兩種轉(zhuǎn)染方式轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞。陽性克隆經(jīng)RT-PCR法評(píng)估LON基因表達(dá)量，同時(shí)設(shè)管家基因β-actin作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照。 結(jié)果顯示LON基因的表達(dá)量在未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞和轉(zhuǎn)染對(duì)照質(zhì)粒的細(xì)胞之間無明顯差別，但在轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pSilencer-LON的細(xì)胞中明顯降低。用MTT法檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞的生長活性，顯示轉(zhuǎn)染對(duì)照質(zhì)粒對(duì)細(xì)胞的生長活性無明顯影響(P＞0.05)，而轉(zhuǎn)染