反義波形蛋白逆轉(zhuǎn)錄病毒對星形膠質(zhì)細胞中間絲蛋白表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：通過體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細胞(astrocyte，Ast)劃傷模型，觀察反義波形蛋白(vimentin，Vim)cDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒對培養(yǎng)損傷的Ast細胞細胞形態(tài)、生長曲線的作用，及其對中間絲Vim和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein，GFAP)表達的影響；建立大鼠脊髓半橫斷損傷模型，觀察大鼠脊髓損傷(spinalcordinjury,SCI)后運動功能及中間絲蛋白表達的變化，并初步探討反義Vi

2、mcDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒、硫酸軟骨素酶ABC及二者聯(lián)合應用對大鼠SCI后中間絲蛋白表達變化的影響，為進一步深入研究反義VimcDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒、硫酸軟骨素酶ABC及二者聯(lián)合應用對大鼠SCI后膠質(zhì)瘢痕形成的作用，探討其對神經(jīng)再生的影響提供初步的研究基礎。 方法： 第一部分，利用大鼠乳鼠大腦皮層組織培養(yǎng)Ast細胞，建立體外培養(yǎng)Ast細胞劃傷模型，通過形態(tài)學觀察、細胞計數(shù)等研究反義VimcDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒對損傷的Ast細胞的影響，

3、并通過細胞免疫熒光、RT-PCR、Westernblot等方法研究Vim和GFAP表達的變化。 第二部分，建立大鼠T10-T11脊髓半橫斷損傷模型，通過RT-PCR、Westernblot等方法研究Vim和GFAP表達的變化，并通過反義VimcDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒及硫酸軟骨素酶ABC局部作用于受損脊髓組織，研究其對Vim和GFAP表達變化的影響。 結(jié)果： 1.反義VimcDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染損傷的Ast細胞后，細胞突

4、起回縮，細胞生長曲線減緩，RT-PCR示VimmRNA表達減低，細胞免疫熒光及Westernblot結(jié)果提示Vim和GFAP蛋白水平表達下調(diào)。 2.大鼠脊髓半橫斷后，損傷側(cè)后肢完全癱瘓，損傷對側(cè)不完全癱瘓，2w時損傷側(cè)后肢無明顯變化，損傷對側(cè)運動功能明顯恢復；免疫組織化學染色提示損傷部位膠質(zhì)瘢痕形成，GFAP及Vim表達增加；RT-PCR示Vim基因表達明顯上調(diào)，Westernblot示GFAP和Vim均明顯表達。 3.

5、SCI大鼠損傷部位注射反義VimcDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒后2w,VimmRNA表達受到抑制，Vim及GFAP表達下調(diào)；注射硫酸軟骨素酶ABC后，VimmRNA及Vim和GFAP的蛋白表達未受到明顯影響。 4.反義VimcDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒及硫酸軟骨素酶ABC聯(lián)合作用于SCI大鼠后2w，VimmRNA表達受到抑制，Westernblot示Vim及GFAP表達下調(diào)。 結(jié)論： 1.反義VimcDNA逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)損傷的