抵抗素基因單核苷酸多態(tài)性與Ⅱ型糖尿病、冠心病的關(guān)聯(lián)性研究以及用DHPLC初步篩查抵抗素基因未知單核苷酸多態(tài)性.pdf

1、Ⅱ型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)、冠心病(coronary heartdisease，CHD)是由多種遺傳和環(huán)境因素共同作用所致的復(fù)雜多基因病，遺傳因素決定并且影響血脂水平，隨著生活水平的提高，兩種疾病的發(fā)病率逐年提高。流行病學(xué)研究表明，脂代謝紊亂影響個(gè)體對(duì)T2DM的易感性，同時(shí)也是CHD的危險(xiǎn)因素。 2001年美國(guó)科學(xué)家Steppan等報(bào)道發(fā)現(xiàn)了抵抗素基因(resistin gene)。

2、抵抗素是一種由脂肪細(xì)胞分泌的新的激素，又稱(chēng)之為脂肪組織特異分泌因子(adipose tissue-specific secretory factor，ADSF)，其作用對(duì)抗胰島素，使血糖水平升高，脂代謝紊亂。 隨著人類(lèi)基因組測(cè)序的完成，研究與疾病表型相關(guān)的序列變異已成為醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)的一個(gè)主要課題。單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)作為第三代遺傳標(biāo)記，數(shù)量大，分布廣，因?yàn)樗亩B(tài)性

3、，檢測(cè)易于自動(dòng)化、批量化。在群體水平上系統(tǒng)地篩查鑒定SNP，并通過(guò)病例-對(duì)照研究和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，有可能獲得與疾病相關(guān)聯(lián)的SNP位點(diǎn)。這對(duì)于闡明某些復(fù)雜多基因疾病的遺傳機(jī)理具有重要意義。 本課題通過(guò)對(duì)中國(guó)四川漢族T2DM患者、CHD患者和健康個(gè)體抵抗素基因已知SNPs的研究和對(duì)未知SNPs的篩查，探討抵抗素基因SNP在中國(guó)四川漢族人群的分布及其與T2DM、CHD的相關(guān)性。 首先我們采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(po

4、lymerase chainreaction-restriction fragment polymorphism，PCR-RFLP)的方法，分析了抵抗素基因-394C>G和-420C>G多態(tài)位點(diǎn)，并初步探討它們與血脂代謝和T2DM、CHD的關(guān)系。其次，運(yùn)用變性高效液相色譜技術(shù)(denaturing high performanceliquid chromatography，DHPLC)和DNA測(cè)序技術(shù)篩查抵抗素基因未知SNPs。

5、 對(duì)于抵抗素基因-394C>G多態(tài)位點(diǎn)，我們分析了中國(guó)四川漢族318例T2DM患者、173例CHD患者及270例健康對(duì)照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)-394C>G多態(tài)位點(diǎn)等位基因G的頻率在T2DM、CHD、健康對(duì)照組中分別是0.3066、0.3555、0.3481，基因頻率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。其基因型頻率和等位基因頻率分布與對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。Hua W等篩查了高加索人群抵抗素基因的SNP位點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)-394

6、C>G多態(tài)性在Ⅱ型糖尿病、正常對(duì)照組中的G等位基因頻率分別為0.36和0.29，兩者差異無(wú)顯著性(P=0.10)。我們報(bào)道的在中國(guó)四川漢族人群Ⅱ型糖尿病、正常對(duì)照組中的G等位基因頻率分別為0.31和0.35。高加索人種、中國(guó)四川漢族兩種族-394C>G多態(tài)等位基因頻率相近。Logistic回歸分析結(jié)果顯示-394C>G多態(tài)位點(diǎn)與Ⅱ型糖尿病、冠心病無(wú)相關(guān)性。盡管結(jié)果顯示-394C>G多態(tài)位點(diǎn)與Ⅱ型糖尿病、冠心病無(wú)相關(guān)性，但是在T2DM組G

7、c基因型HDL-C水平較CC基因型顯著升高(P<0.05)，而對(duì)照組人群GC基因型HDL-C水平較CC基因型顯著降低(P<0.05)，在CHD組差異則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。盡管GG與GC基因型HDL-C水平比較無(wú)差異性，但在Ⅱ型糖尿病組中GC、GG、CC各基因型HDL-C水平呈梯度下降，而在對(duì)照人群中則呈梯度上升。這說(shuō)明抵抗素基因-394C>G多態(tài)性與HDL-C存在較密切的關(guān)聯(lián)。另外，抵抗素基因-394C>G多態(tài)位點(diǎn)三種基因型的

8、性別構(gòu)成在T2DM組中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.033)。說(shuō)明三種基因型的性別構(gòu)成與T2DM相關(guān)聯(lián)。這在國(guó)內(nèi)外尚屬首次報(bào)道。 同時(shí)，對(duì)于抵抗素基因-420C>G多態(tài)位點(diǎn)，我們分析了中國(guó)四川漢族227例T2DM患者、153例CHD患者及241例健康對(duì)照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)-420C>G多態(tài)位點(diǎn)等位基因G的頻率在T2DM、CHD、健康對(duì)照組中分別是0.4009、0.3725、0.3859，基因頻率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。其基

9、因型頻率和等位基因頻率分布與對(duì)照組比較均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。T2DM、健康對(duì)照組別中，中國(guó)人-420C>G多態(tài)位點(diǎn)G等位基因頻率與歐洲白人比較，差異存在顯著性(0.40vs0.27，0.39vs0.26)(P<0.01)。Logistic回歸分析結(jié)果顯示-420C>G多態(tài)位點(diǎn)與Ⅱ型糖尿病、冠心病無(wú)相關(guān)性。盡管結(jié)果顯示四川漢族人群-420C>G多態(tài)位點(diǎn)與Ⅱ型糖尿病、冠心病無(wú)相關(guān)性，但是這與董艷等研究結(jié)果顯示華東地區(qū)漢族人群抵抗素

10、基因-420C>G的多態(tài)性與Ⅱ型糖尿病無(wú)相關(guān)性一致。我們的研究結(jié)果顯示，中國(guó)四川漢族抵抗素基因-420C＞G多態(tài)位點(diǎn)中，Ⅱ型糖尿病、冠心病以及對(duì)照組人群各基因型間血脂水平的比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。Cho等報(bào)道在韓國(guó)人群中抵抗素基因-420C＞G多態(tài)位在Ⅱ型糖尿病與對(duì)照組人群各基因型間血脂水平的比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。這與我們的報(bào)道相近。 另外，我們運(yùn)用DHPLC技術(shù)篩查到抵抗素基因外顯子3(Exon3)兩