內異消對鼠子宮內膜異位癥的治療作用及其免疫學機制初探.pdf

1、子宮內膜異位癥(內異癥，EMs)是指具有生長功能的子宮內膜組織生長在子宮腔以外的其他部位而產生的病變。EMs是育齡婦女的常見病，發(fā)病率在育齡婦女中約為10～15％，在不孕婦女中的發(fā)病率約占50％。臨床表現為痛經、月經不調、腹腔疼痛、性交疼痛、不孕等。EMs的發(fā)病機理并不明確，經血逆流學說與異常的腹腔免疫環(huán)境被認為是EMs發(fā)生發(fā)展的重要因素。逆流進腹腔的子宮內膜細胞逃脫了免疫細胞的監(jiān)視，被“允許”在腹腔中種植。內異癥患者異位組織、血液及腹

2、腔液中受核轉錄因子NF-κB途徑調控的IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及 TGF-β1等炎癥因子的含量顯著升高，這些炎癥因子在異位組織侵襲、粘附、異位子宮內膜細胞增殖、異位組織血管生成等方面都起到了促進作用。巨噬細胞作為腹腔中占主導地位的免疫細胞，在內異癥的形成和發(fā)展中扮演著重要角色。內異癥患者腹腔巨噬細胞數量增多，抗原遞呈能力減弱，吞噬能力減弱，分泌能力增加。這些變化促進了內異癥的發(fā)生發(fā)展。
　　 內異消是課題組自主

3、創(chuàng)制的抗子宮內膜異位癥的中藥新藥，由川芎嗪、阿魏酸、延胡索乙素3種中藥單體有效成分組成的復方藥物，已申報國家技術發(fā)明專利，并得到科技部“重大新藥創(chuàng)制”重慶孵化基地專項資助。本研究觀察內異消對大鼠子宮內膜異位癥的治療作用，并以免疫環(huán)境為切入點，以動物整體實驗和細胞實驗探討藥物作用機制。為內異消提供抗子宮內膜異位癥的主要藥效學及其作用機制的試驗基礎。
　　 目的:觀察內異消對大鼠子宮內膜異位癥的治療作用及對相關免疫系統(tǒng)的調節(jié)作用，為

4、將內異消研制成為抗子宮內膜異位癥的中藥新藥提供主要藥效學試驗依據，并闡釋其在免疫調節(jié)方面的作用機制。
　　 方法:
　　 (1)造模及模型成功標準選取性周期正常的SD大鼠，于動情期采用自體移植法，取子宮內膜組織縫于腹腔壁上，建立大鼠子宮內膜異位癥模型。28天后，游標卡尺測量移植物長、寬、高，以移植物長大體積≥8mm3且表面有血管生成，隨機抽取異位組織進行病理檢測，證實是存活的子宮內膜組織為模型成功標準。
　　 (

5、2)分組與給藥取造模成功的大鼠隨機分為空白組，模型組，孕三烯酮組，內異消0.18 g·kg-1組，0.09 g·kg-1組，0.045 g·kg-1組。用藥前經SPSS13.0統(tǒng)計分析，各組間異位組織體積無顯著差異(P>0.05)。連續(xù)灌胃給藥28天，每天1次。
　　 (3)內異消抗大鼠子宮內膜異位癥療效觀察給藥28天后，測量異位組織體積，觀察給藥后異位組織體積，給藥前后異位組織體積變化及體積變化率；常規(guī)HE染色，觀察異位組織形

6、態(tài)變化；取脾臟組織稱重，計算脾臟指數。
　　 (4)內異消對子宮內膜異位癥大鼠炎癥因子的影響給藥28天后，乙醚麻醉大鼠，取血、腹腔液及異位組織；ELISA法檢測血清及腹腔液中TNF-α、IL-1β的含量；免疫組織化學法檢測異位組織中IL-6、IL-8、TGF-β1及 IκBα的表達，以陽性表達個數為觀察指標；Western blot法檢測異位組織中IκBα的表達。
　　 (5)內異消對子宮內膜異位癥大鼠腹腔巨噬細胞活性的

7、影響給藥28天后，于末次給藥30分鐘后乙醚麻醉大鼠，取血，分別制備空白組，模型組，孕三烯酮組，內異消0.18 g·kg-1灌胃給藥組、內異消0.09 g·kg-1灌胃給藥組、內異消0.045g·kg-1灌胃給藥組含藥血清。取血后分別取各組大鼠腹腔巨噬細胞常規(guī)培養(yǎng)，除空白組外，各組加入10μg·mL-1LPS刺激，同時分別給予相應各組含藥血清。采用MTT法檢測巨噬細胞增殖能力，中性紅法檢測巨噬細胞吞噬能力，ELISA法檢測上清液中TNF-

8、α、IL-1β含量，western blot檢測巨噬細胞中IκBα的表達。
　　 結果:
　　 (1)內異消對內異癥大鼠異位組織及脾臟指數的影響與模型組比較，內異消0.18 g·kg-1，0.09 g·kg-1，0.045 g·kg-1能夠顯著減小內異癥大鼠異位組織體積，且抑制率與藥物劑量呈正相關。顯微形態(tài)顯示：與模型組比較，內異消0.18 g·kg-1，0.09 g·kg-1，0.045 g·kg-1組能夠減輕異位組織

9、病理改變程度，異位內膜功能層變薄，細胞結構變松散。與模型組相比，內異消0.18 g·kg-1組能夠顯著增加大鼠脾臟指數。
　　 (2)內異消對內異癥大鼠異位組織中炎癥因子的影響免疫組化法觀察顯示，與模型組比較，內異消0.18 g·kg-1，0.09 g·kg-1，0.045 g·kg-1能夠顯著減少異位組織中IL-6、TGF-β1的表達，增加IκBα的表達，內異消0.18 g·kg-1，0.09 g·kg-1能夠顯著減少異位組織

10、中IL-8的表達；W-B法觀察結果顯示內異消0.18 g·kg-1，0.09 g·kg-1，0.045 g·kg-1能夠增加IκBa的表達。
　　 (3)內異消對內異癥大鼠血液及腹腔液中炎癥因子的影響內異消0.18g·kg-1，0.09 g·kg-1能夠顯著減少血液及腹腔液中TNF-α、IL-1β的含量。
　　 (4)內異消含藥血清對內異癥大鼠腹腔巨噬細胞的影響與模型組比較，內異消0.18 g·kg-1，0.09g·kg

11、-1，0.045g·kg-1灌胃給藥組含藥血清對腹腔巨噬細胞數量無顯著影響，顯著減少上清液中TNF-α、IL-1β含量，顯著提高巨噬細胞中IκBα的含量，0.18 g·kg-1灌胃給藥組含藥血清能夠顯著提高巨噬細胞的吞噬能力。
　　 結論:
　　 (1)內異消能夠顯著減小內異癥大鼠異位組織體積，減輕異位組織病理改變。其機制可能是通過抑制IκBα降解，調節(jié)NF-κB核轉錄途徑，從而減少異位組織、中炎癥因子的表達；通過減少血