野木瓜注射液及野木瓜提取物對H2O2氧化損傷神經(jīng)元的保護作用.pdf

1、目的：研究野木瓜注射液(IS)對H2O2氧化損傷大腦皮層和脊髓神經(jīng)元的細胞保護作用，比較并分析兩者的區(qū)別。測定IS及野木瓜提取物(AI1，AI2，AI3)的體外抗氧化能力。分析野木瓜提取物中黃酮苷及三萜皂苷類化合物的含量，并測定AI1，AI2，AI3的抗氧化能力及對氧化損傷大腦皮層和脊髓神經(jīng)元的細胞保護作用。本課題為野木瓜的抗氧化保護機制提供理論依據(jù)。
　　 方法：通過MTT法測定IS對未損傷的大腦皮層和脊髓神經(jīng)元細胞存活率的影

2、響。建立H2O2氧化損傷模型，確定對神經(jīng)細胞的損傷濃度。通過MTT法、胞內(nèi)SOD活力和細胞外液LDH釋放量的測定檢測IS對。H2O2氧化損傷大腦皮層和脊髓神經(jīng)元的細胞保護作用。并且運用激光共聚焦顯微鏡測定氧化受損及IS保護對脊髓神經(jīng)元胞漿內(nèi)Ca2+濃度的變化。通過脫氧核糖法測定IS體外清除·OH的能力并通過胞內(nèi)SOD活力和細胞外液LDH釋放量的測定檢測IS對未受損大腦皮層和脊髓神經(jīng)元細胞的影響。通過標準曲線法測定分析AI1，AI2和AI

3、3中黃酮苷及三萜皂苷類化合物的含量，并且運用脫氧核糖法測定比較AI1，AI2和AI3清除·OH的能力。AI1，AI2和AI3對H2O2氧化損傷大腦皮層和脊髓神經(jīng)元的細胞保護作用通過MTT法測定。
　　 結(jié)果：IS對大腦皮層神經(jīng)元生長情況無顯著性影響，但在100—200 mg/L時對脊髓神經(jīng)元有顯著地促進生長作用。100μmol/L H2O2對神經(jīng)細胞作用3天后，皮層和脊髓神經(jīng)元細胞存活率分別為80％和70％左右。僅IS作用于未受

4、損皮層神經(jīng)元，其細胞存活率、胞內(nèi)SOD活力、細胞外液LDH釋放量均無顯著性變化；但IS能夠增加氧化受損皮層神經(jīng)元存活率，上升胞內(nèi)SOD和降低細胞外液LDH的漏出。IS對未受損脊髓神經(jīng)元的SOD活力無顯著影響，但能夠降低胞外LDH漏出；IS也能夠增加氧化受損脊髓神經(jīng)元存活率，提升胞內(nèi)SOD并且降低細胞外液LDH的漏出，同時阻止脊髓神經(jīng)元內(nèi)Ca2+超載。IS及野木瓜提取物AI1，AI2和AI3都有很高的清除·OH的能力，并且呈一定的濃度依賴

5、性。AI3的·OH清除率高于AI1和AI2．AI1，AI2和AI3中黃酮苷類物質(zhì)含量為9％，11％和27％；三萜皂苷類物質(zhì)含量為26．9％，41．7％和52．3％。AI1，AI2和AI3對氧化受損神經(jīng)元都具有一定的保護作用，但對皮層神經(jīng)元的保護作用明顯優(yōu)于對脊髓神經(jīng)元的作用，AI3在高濃度時的大腦皮層神經(jīng)元存活率為112．7％。
　　 結(jié)論：IS本身就能夠促進脊髓神經(jīng)元的生長，但對皮層神經(jīng)元無顯著影響。IS通過調(diào)節(jié)一系列抗氧化酶