h-PNAS-4抑制人卵巢癌細胞系體外增殖的研究.pdf

1、實驗目的：h-PNAS-4是近來發(fā)現(xiàn)的新基因，初步的研究表明，它是一凋亡相關基因。本實驗旨在研究新基因h-PNAS-4對人卵巢癌細胞系：順鉑耐藥細胞株A2780/DDP、敏感株A2780和細胞株skov。同時觀察h-PNAS-4聯(lián)合熱處理時對上述細胞系體外增殖的影響。實驗方法：用脂質(zhì)體(Lipofectamine2000)轉(zhuǎn)染的方法將h-PNAS-4分別導入細胞株A2780/DDP、A2780和skov-3，同時導入帶有表達綠色熒光蛋白

2、(GFP)的h-PNAS-4，通過熒光計數(shù)確定轉(zhuǎn)染效率；利用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT法)檢測轉(zhuǎn)染后48小時h-PNAS-4對人卵巢癌細胞系體外增殖的抑制作用；瓊脂糖凝膠電泳(DNA LADDER)及HOECHST染色檢測其誘導凋亡的作用；轉(zhuǎn)染后24小時，將各細胞系進行熱處理(43℃，2h)，再于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)22小時，采用Weeb系數(shù)判定h.PNAS-4聯(lián)合熱處理對上訴細胞系體外增殖的作用。 實驗結(jié)果： 1.脂質(zhì)體Li

3、pofectamine2000能成功的將新基因h-PNAS-4導入人卵巢癌細胞系。 2.h-PNAS-4能明顯的抑制人卵巢癌細胞增殖：在細胞系A2780/DDP、A2780中其抑制率分別為48.32％、60.48％，與各對照組相比，其P<0.05。 3．h-PNAs-4能顯著的誘導人卵巢癌細胞的凋亡：瓊脂糖凝膠電泳(DNA LADDER)顯示DNA呈現(xiàn)階梯狀條帶；HOECHST染色表現(xiàn)出核濃縮、分裂及深染。 4．