HMGA2在非小細胞肺癌中表達的臨床病理意義及其與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化之間的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　肺癌在多數(shù)發(fā)展中國家的腫瘤性死亡中占首位。它的一個病理學特點是具有較強的侵襲及轉(zhuǎn)移傾向。在腫瘤的侵襲前沿部位，腫瘤細胞脫離癌巢，獨立生長，并發(fā)生外形變化，由多角形轉(zhuǎn)變?yōu)轭愃朴陂g質(zhì)細胞的梭形[1，2，3]。近期的研究表明，在多種癌癥中侵襲部的腫瘤細胞會丟失某些上皮組織特性如E-cadhelin表達缺失，而獲得某些間質(zhì)細胞特性如一些間質(zhì)蛋白的表達增強[4]。由梭形及多形細胞構(gòu)成的肉瘤往往表現(xiàn)出強侵襲性的生物學特點及很差的預(yù)

2、后。那么癌上皮細胞可能會因為間質(zhì)化而獲得間質(zhì)惡性腫瘤的這些特點[5]。因此，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化即癌細胞的間質(zhì)化過程被認為是腫瘤發(fā)展過程中的重要步驟。然而，非小細胞肺癌細胞間質(zhì)化確切的分子機制仍知之甚少。HMGA2是一種構(gòu)象因子，通過三個DNA結(jié)合域(AT-hooks)結(jié)合其他的轉(zhuǎn)錄因子，從而擁有改變DNA構(gòu)型的能力[6，7]。HMGA2參與胚胎的形成過程的特定時期，并且參與了一些良性間質(zhì)組織腫瘤如脂肪瘤，脂肪肌瘤，平滑肌瘤的形成[8，9，1

3、0]。有證據(jù)表明HMGA2在間質(zhì)細胞的分化和增殖過程中起到了重要作用。而許多實驗也表明多種惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)HMGA2高表達，并且其表達與預(yù)后相關(guān)。
　　本試驗中，我們應(yīng)用免疫組織化學方法、Westernblot以及Real-Time RT-PCR方法測定HMGA2在非小細胞肺癌(NSCLC)中的表達情況，并研究HMGA2在NSCLC中的組織定位情況以及HMGA2的表達與患者預(yù)后之間的關(guān)系。
　　方法：
　　1、臨床標本的

4、收集:總共67例非小細胞肺癌標本均為日本金澤醫(yī)科大學外科手術(shù)切除，并獲得患者同意取樣。取得時間為1998.10-2004.9。35例鱗癌(11例中心型，24例周圍型;7例高分化，22例中分化，6例低分化）;29例腺癌(15例高分化其中7例細支氣管肺泡癌，7例中分化，7例低分化);3例原位癌。鱗癌平均年齡71歲（57-84歲），腺癌平均年齡59歲（47-79歲）。平均隨訪時間42個月（12-86個月）。所有患者術(shù)前均未行放化療。所有標本均

5、經(jīng)10％甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，均經(jīng)HE染色組織學觀察。病例診斷均經(jīng)術(shù)后病理證實。
　　另外獲得以上病例中29例鱗癌及29例腺癌-80℃液氮深凍儲存標本。
　　2、免疫組織化學染色及結(jié)果分析:應(yīng)用ABC免疫組化試劑盒按照ABC法進行免疫組化染色，免疫組化染色結(jié)果采用二級記分法進行判定，結(jié)果判定由兩位病理科醫(yī)生分別獨立完成，取二者平均值作為最終結(jié)果。
　　3、Realtime RT-PCR熒光定量法檢測

6、HMGA2在組織標本中的表達:肺癌組織、癌旁正常肺組織均按ISOGEN法提取總RNA，然后進行RealtimeRT-PCR檢測，GAPDH作為看家基因作為每次反應(yīng)RNA量的內(nèi)參照。
　　4、Western Blot半定量法檢測HMGA2在組織標本中的表達:肺癌組織、癌旁正常肺組織和肺癌細胞按照常規(guī)方法提取胞漿總蛋白，進行蛋白定量后，進行Western Blot，最終的結(jié)果進行半定量分析。
　　5、用SPSS11.0軟件包進行

7、統(tǒng)計分析。應(yīng)用One-Way ANOVA比較各組臨床病理因素間HMGA2mRNA及蛋白表達的差異。應(yīng)用Kaplan-Meier曲線進行預(yù)后分析，用log-rank檢驗比較預(yù)后差異。使用多因素的Cox—比例風險回歸分析決定是否為獨立預(yù)后風險因素。P＜0.05被認為有統(tǒng)計學意義。原位癌例數(shù)較少不列為統(tǒng)計之中。
　　結(jié)果：
　　1、首先我們通過免疫組織化學、RT-PCR和Western Blot的方法檢測HMGA2mRNA和HMG

8、A2蛋白在非小細胞肺癌組織、癌旁正常肺組織中的表達，不同的方法檢測的結(jié)果一致顯示其在肺癌組織中的表達顯著高于其在正常肺組織中的表達。HMGA2表達于NSCLC的細胞核，正常肺組織細胞均未表達。在鱗癌中，HMGA2的表達陽性率是62.9％(22/35)，并且陽性表達的部位僅限于腫瘤邊緣的侵襲部前沿，而在腫瘤的中心部位腫瘤細胞很少有陽性反應(yīng)。而3例原位鱗癌并沒有表達HMGA2。腺癌中HMGA2表達陽性率為75.9％(22/29)，其表達通常

9、位于沿肺泡壁生長的細胞以及粘液中的飄浮細胞HMGA2在肺鱗癌中的表達與TNM分期，T分期及N分期存在有意義的相關(guān)性。在Ⅱ-Ⅳ期，T3-4的病例中的表達分別高于Ⅰ期，T1-2 N(-)的病例。N(+)陽性病例HMGA2均表達陽性。
　　2、HMGA2的表達與腫瘤的轉(zhuǎn)移及患者轉(zhuǎn)歸相關(guān)。HMGA2的表達陽性者的預(yù)后明顯不如HMGA2的表達陰性者(P＜0.05)。35例鱗癌中15例患者死于腫瘤復(fù)發(fā)，所有這15例患者HMGA2均表達陽性。其

10、中8人術(shù)后病理證實有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，7例沒有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移但是HMGA2表達陽性，腫瘤出現(xiàn)復(fù)發(fā)。其余20例患者中有6例死于非腫瘤原因。所有的22例HMGA2表達陽性者中7例未出現(xiàn)復(fù)發(fā)，其中4例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，3例淋巴結(jié)為陰性（均為Ⅰ期）。提示HMGA2表達陽性而術(shù)后未復(fù)發(fā)者，可能在腫瘤的早期就完成了有效的外科根治手術(shù)。 Kaplan-Meier曲線進行預(yù)后分析表明HMGA2表達陰性者的預(yù)后明顯好于陽性者。應(yīng)用多因素的Cox回歸分析表明:轉(zhuǎn)移情況，

11、N分期以及HMGA2染色結(jié)果均為有意義的獨立預(yù)后影響因子。HMGA2染色陽性結(jié)果是一個獨立的生存期預(yù)測因子其風險指數(shù)為3.482，95％可信區(qū)間分別為:1.395-8.691。而其他的因素包括年齡、性別、T分期、生長方式及組織學分化程度均未能與預(yù)后獨立相關(guān)。
　　3、通過對HMGA2與E-cadherin，TP53，PCNA免疫組化表達結(jié)果的比較表明，HMGA2的表達與TP53，PCNA的表達并沒有有意義的相關(guān)性，而與E-cadh

12、erin的表達結(jié)果在大多數(shù)標本中，兩者表達呈現(xiàn)負相關(guān)的趨勢，并且在相應(yīng)的表達部位兩者也是呈負相關(guān)的，即在腫瘤的侵襲部前沿HMGA2高表達，而E-cadherin弱表達或不表達。
　　結(jié)論：
　　1、高遷移率蛋白基因HGMA2在NSCLC組織中明顯高于其在正常肺組織中的表達，并且與患者的臨床病理因素（病理分期、N因素、T分期）相關(guān)，基于此，可為NSCLC的病理診斷提供了一個新的免疫組織化學指標，可能會對NSCLC的診斷提供一定