新型鄰菲羅啉衍生物與四鏈體DNAs的相互作用及體外生物活性研究.pdf

1、四鏈體DNA特殊結(jié)構(gòu)的發(fā)現(xiàn)結(jié)合現(xiàn)代分子生物學技術(shù)對其生物學功能與腫瘤關(guān)系的揭示，為高效、低毒抗腫瘤藥物的開發(fā)提供了新契機。本課題利用生物物理學和生物化學法系統(tǒng)地研究了新穎二取代鄰菲羅啉衍生物(3a-5a、3b-5b)與人端粒h-telo、i-motif以及原癌基因啟動子(c-myc、c-kit2)四鏈體DNAs間的鍵合作用，并檢測了化合物對端粒酶活性、癌細胞增殖以及細胞周期進程的影響。
　　 1.FRET-melting、UV-

2、melting與PCRStop實驗結(jié)果表明，六個化合物是潛在的四鏈體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定劑;競爭FRET-melting實驗指出化合物可在不同程度上選擇性識別G-四鏈體DNAs，特別地，乙?；鶄?cè)鏈延長系列3b-5b表現(xiàn)出對G-四鏈體相對于雙螺旋DNA更強的識別能力。TRAP分析得出，化合物在微摩爾級濃度顯著地抑制了端粒酶活性。
　　 2.FID、紫外可見吸收滴定、等摩爾連續(xù)變化及熒光滴定實驗結(jié)果顯示，所有化合物是好的四鏈體DNAs鍵合劑，與

3、四鏈體DNAs的相互作用模式可能為π-π堆積?；衔锱cG-四鏈體DNAs、i-motif以及ct-DNA的結(jié)合常數(shù)范圍分別為0.55～7.24×105M-1、1.22～8.12×104M-1和1.05～2.51×105M-1;對于相同系列的化合物，與G-四鏈體DNA的結(jié)合常數(shù)大于與ct-DNA以及與i-motif的結(jié)合常數(shù)。與h-telo、i-motif四鏈體的鍵合計量比分別為2∶1和1∶1。
　　 3.CD實驗表明，化合物可誘

4、導人端粒四鏈體形成反平行G-四鏈體構(gòu)象;c-myc、c-kit2以及i-motif四鏈體的CD譜特征峰形狀沒有明顯變化，化合物僅對其二級結(jié)構(gòu)、構(gòu)象產(chǎn)生微擾。
　　 4.MTT比色法研究顯示，3b-5b均能抑制MCF7和HepG2細胞增殖，其中3b效果最顯著，相應(yīng)的IC50值分別為1.48和6.86μM。細胞周期測試表明，化合物3b-5b都能不同程度阻止MCF7和HepG2細胞周期進程，對于MCF7細胞，3b誘導細胞周期停滯在G2