聲帶白斑臨床分型及半乳糖凝集素-3在聲帶白斑中表達的作用研究.pdf

1、目的:
　　(1)比較聲帶白斑喉鏡分型對應的病理診斷，探索聲帶白斑喉鏡下分型與病理的關系，觀察部分聲帶白斑患者轉(zhuǎn)歸情況，為指導聲帶白斑患者選擇合適的治療及手術方案提供參考;(2)驗證半乳糖凝集素3(Galectin-3)及自噬相關因子在聲帶白斑中的表達，分析其在不同類別聲帶白斑中的表達的意義及可能機制，為下一步實驗研究做好準備工作。
　　方法:
　　回顧性分析2003年1月至2014年3月就診于復旦大學附屬眼耳鼻喉科醫(yī)

2、院耳鼻喉科因聲帶白斑住院治療的患者資料。并對聲帶白斑進行分型:平坦光滑型（Ⅰ型），隆起光滑型（Ⅱ型），肥厚粗糙型（Ⅲ型）;根據(jù)患者術后病理分組為:無不典型增生組（A組），輕度不典型增生組（B組），中度不典型增生組(C組)，重度不典型增生組（D組）和癌變組（E組）。統(tǒng)計各組聲帶數(shù)量，分析各型各組特點。隨訪觀察平坦光滑型聲帶白斑的轉(zhuǎn)歸。
　　收集2012年4月25日至2013年9月26日就診于復旦大學附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院患者，包括聲帶息

3、肉、聲帶白斑，懷疑為喉癌者行活檢的標本，進行Real-time PCR、Western blot、免疫組化、電鏡檢測，觀察Galectin-3及自噬相關因子基因、蛋白水平的表達情況及表達位置、是否存在自噬體。
　　結(jié)果:
　　1170例聲帶白斑患者，共1635側(cè)聲帶，其中402側(cè)(24.6％)聲帶白斑為平坦光滑型（Ⅰ型），609側(cè)(37.2％)聲帶白斑為隆起光滑型（Ⅱ型），624側(cè)(38.2％)聲帶白斑為肥厚粗糙型（Ⅲ型）。

4、
　　在402側(cè)平坦光滑型（Ⅰ型）聲帶白斑中，無不典型增生組占該組聲帶數(shù)的比例最高，為76.9％，是隆起光滑型無不典型增生聲帶白斑217側(cè)(35.6％)的2.2倍，是肥厚粗糙型無不典型增生聲帶白斑的2.6倍。其次為輕度不典型增生組51側(cè)(12.7％)聲帶;中度不典型增生組(2.7％)、重度不典型增生組(3.9％)和癌變組(3.7％)的比例均較低。
　　在609側(cè)隆起光滑型（Ⅱ型）聲帶白斑中，無不典型增生組35.6％的比例較Ⅰ

5、型組中對應的病理各組的比例明顯下降;輕度不典型增生組占35.5％、中度不典型增生組為9.7％;重度不典型增生組(8.4％)和癌變組(10.8％)的比例明顯增高。
　　624側(cè)為肥厚粗糙型（Ⅲ型）聲帶白斑中，無不典型增生、輕度不典型增生和中度不典型增生的比例分別為13.8％、25.3％和10.1％;重度不典型增生組(21.5％)和癌變組(29.3％)的比例最高。肥厚粗糙型（Ⅲ型）聲帶白斑的重度不典型增生（D組）比例是隆起光滑型(Ⅱ型

6、)重度不典型增生（D組）聲帶白斑的2.6倍，是平坦光滑型（Ⅰ型）重度不典型增生（D組）聲帶白斑的5.5倍。肥厚粗糙型（Ⅲ型）聲帶白斑的癌變（E組）比例是隆起光滑型（Ⅱ組）癌變(E組)比例的2.7倍，是平坦光滑型（Ⅰ型）癌變（E組）比例的7.9倍。卡方檢驗比較不同喉鏡分型中不同病理結(jié)果的聲帶數(shù)，差異有統(tǒng)計學意義，x2=410.1，p=0.000。
　　行病因治療和中成藥治療的162例光滑平坦型聲帶白斑患者，總隨訪時間為160天（5.

7、3月）至3519天（9.6年），隨訪中位數(shù)904天（2.5年）。其中，100例(61.7％)治愈;48例(29.6％)聲帶白斑持續(xù)存在;11例(6.8％)聲帶白斑復發(fā);3例(1.9％)聲帶白斑在保守治療期間加重。
　　定量PCR驗證galectin-3在聲帶息肉、聲帶白斑、喉癌組織中的表達情況，表達量分別為3.28、2.24、0.49。統(tǒng)計學比較三者的差異，差異均有統(tǒng)計學意義:t息肉、白斑=2.06，p息肉、白斑=0.05;t息肉

8、、喉癌=4.78，p息肉、喉癌=0.00;t白斑、喉癌=4.47，p白斑、喉癌=0.00。驗證自噬相關分子lc3b、beclin-1在聲帶息肉、聲帶白斑、喉癌中的表達情況，lc3b的表達量分別為1.39、2.28、1.06;beclin-1的表達量分別為1.86、2.67、1.14。統(tǒng)計學比較三者的差異，差異均無統(tǒng)計學意義:tlc3b息肉、白斑=0.74，plc3b息肉、白斑=0.46;tlc3b息肉、喉癌=0.46，plc3b息肉、喉

9、癌=0.65;tlc3b白斑、喉癌=0.65，plc3b白斑、喉癌=0.52;tceclin-1息肉、白斑=0.83, pbeclin-1息肉、白斑=0.41;tbeclin1息肉、喉癌=0.87，pbeclin-1息肉、喉癌=0.39;tbeclin-1白斑、喉癌=1.03，pbeclin-1白斑、喉癌=0.31。
　　分析基因水平galectin-3、lc3b、beclin-1在聲帶白斑組織有無不典型增生及各類不典型增生情況、

10、有無癌變的表達差異，統(tǒng)計學比較后部分結(jié)果有統(tǒng)計學意義。
　　在白斑組織的驗證結(jié)果中，用定量PCR的結(jié)果計算galectin-3與beclin-1的相關系數(shù)，r=0.36，p=0.02，可以認為兩者相關;計算galectin-3與lc3b的相關系數(shù)，r=0.08，p=0.62，兩者無相關性。
　　Western Blot驗證GALECTIN-3在聲帶息肉、聲帶白斑、喉癌組織中的表達情況，GALECTIN-3的表達量分別為2.3

11、0、2.58、1.31，統(tǒng)計學比較三者的差異:t息肉、白斑=0.39，p息肉、白斑=0.70;t息肉、喉癌=2.03，p息肉、喉癌=0.05;t白斑、喉癌=2.57，p白斑、喉癌=0.01，聲帶白斑與喉癌的表達差異有統(tǒng)計學意義。
　　Western Blot驗證自噬相關分子BECLIN-1在聲帶息肉、聲帶白斑、喉癌中的表達情況，表達量分別為1.81、1.71、0.55，統(tǒng)計學比較后發(fā)現(xiàn)在聲帶白斑和喉癌中的差異有統(tǒng)計學意義:tbec

12、lin-1息肉、白斑=0.16，pbeclin-1息肉、白斑=0.87;tbeclin-1息肉、喉癌=2.40，pbeclin-1息肉、喉癌=0.03; tbeclin-1白斑、喉癌=2.92，pbeclin-1白斑、喉癌=0.01。
　　分析蛋白水平GALECTIN-3、BECLIN-1在聲帶白斑組織有無不典型增生及各類不典型增生情況、有無癌變的表達差異，統(tǒng)計學比較后部分結(jié)果有統(tǒng)計學意義。
　　使用Western Blot

13、的結(jié)果計算所有白斑組織中，Galectin-3與Beclin-1的相關系數(shù)，r=0.60，p=0.00，可以認為兩者的表達量具有相關性。
　　免疫組化染色顯示Galectin-3主要表達在細胞質(zhì)和細胞膜上，Beclin-1、LC3B主要表達在細胞質(zhì)中。透射電鏡下聲帶白斑組織中存在自噬體。
　　結(jié)論:
　　光滑平坦型聲帶白斑，病理主要為無不典型增生和輕度不典型增生(89.6％)，其保守治療治愈率高(61.7％)，且癌變率

14、低(3.7％)，為白斑早期，宜先保守治療。隆起光滑型（Ⅱ型）聲帶白斑病理仍以無不典型增生和輕度不典型增生為主(71.1％)，但癌變率較高(10.8％)，不宜保守治療。肥厚粗糙型（Ⅲ型）聲帶白斑病理主要以中、重度不典型增生及白斑癌變?yōu)橹?60.9％)，癌變率極高(29.3％)，為白斑晚期，建議應盡早手術治療。
　　聲帶白斑組織中有自噬的發(fā)生，Galectin-3與自噬相關分子之一Beclin-1的表達量有一定相關性，其發(fā)生相互作用的