三七對(duì)兔頸椎間盤細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：本課題通過觀察中藥三七對(duì)家兔頸椎間盤細(xì)胞凋亡的影響，為臨床上應(yīng)用中藥三七防治頸椎病提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：隨機(jī)將24只新西蘭大白兔分為A、B、C組，每組8只，A為造模給藥組，B組為造模對(duì)照組（A、B兩組均頸椎間盤退變模型）,C組為正常假手術(shù)組,造模方法如下：將兔頸后部剃毛,以化學(xué)純氨基酸乙酯（烏拉坦）麻醉，用0.9％鹽水將其配成25%的溶液，按1g/kg（4ml/kg）耳緣靜脈注射，麻醉后，新潔爾滅酊消毒,無菌操作。術(shù)前1

2、0分鐘給青霉素(20萬u/kg)肌注一次,造模后切口涂敷少許紅霉素軟膏預(yù)防術(shù)后感染.A、B兩組均為頸椎間盤退變模型，按照靜力失衡性頸椎病動(dòng)物模型的造模方法,俯臥位固定,取頸后部正中縱向切口（從環(huán)枕關(guān)節(jié)至第二胸椎棘突處）長(zhǎng)約7cm切開皮膚后,鈍性分離直至充分暴露棘突。將脊柱兩側(cè)附著于棘突椎板及小關(guān)節(jié)的肌肉全部分離,然后依次切除C2～C7棘上及棘間韌帶,術(shù)后依序縫合皮下筋膜及皮膚。C組為正常假手術(shù)組，在頸后部正中皮膚上作一長(zhǎng)約7cm的切口,

3、止血后縫合。
　　3組動(dòng)物均于5天后拆線,A組給中藥三七，通過將藥物均勻混入飼料中給藥,劑量均按體重?fù)Q算﹙20mg/kg·d﹚;B組不給藥,為模型空白對(duì)照組；C組不給藥，為正常對(duì)照組。3組動(dòng)物在同樣環(huán)境中自由飲水、攝食。手術(shù)造模六月后,將大白兔全部處死,取頸6-7椎間盤及相鄰部分椎體,觀察椎間盤形態(tài)學(xué)及免疫組化染色觀察椎間盤細(xì)胞凋亡指數(shù)。
　　結(jié)果：1、HE染色結(jié)果(圖1~3)，A組（造模給藥組）：較模型組明顯好轉(zhuǎn)，纖維環(huán)膠

4、原排列稍松散，輕度粘液變；髓核軟骨細(xì)胞數(shù)量較模型組明顯增多，排列稍亂，變性細(xì)胞少。B組（造模對(duì)照組）：纖維環(huán)膠原排列松散，粘液變明顯，髓核軟骨細(xì)胞數(shù)量明顯減少，排列紊亂，細(xì)胞分布疏密不均，并出現(xiàn)變性細(xì)胞。C組（正常假手術(shù)組）：椎間盤由外周規(guī)則排列的纖維環(huán)和髓核構(gòu)成，髓核細(xì)胞量多，排列規(guī)整，分布均勻；細(xì)胞形態(tài)良好。
　　2、TUNEL免疫熒光染色的結(jié)果顯示(圖4~6),C組（正常假手術(shù)組）的椎間盤組織雖有陽性染色細(xì)胞出現(xiàn),但數(shù)量較少

5、,40倍光鏡下計(jì)數(shù)20個(gè)視野,平均每個(gè)視野的陽性細(xì)胞數(shù)僅為3個(gè)。B組（造模對(duì)照組）椎間盤組織內(nèi)則有大量TUNEL陽性染色細(xì)胞出現(xiàn),40倍光鏡下計(jì)數(shù)20個(gè)視野,平均每個(gè)視野的陽性細(xì)胞數(shù)為11個(gè)。A組（造模給藥組）椎間盤組織內(nèi)TUNEL陽性染色細(xì)胞出現(xiàn)較模型空白對(duì)照組明顯減少40倍光鏡下計(jì)數(shù)20個(gè)視野,平均每個(gè)視野的陽性細(xì)胞數(shù)為4個(gè)。Vidas圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行免疫陽性細(xì)胞半定量分析,結(jié)果測(cè)得正常組，實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組平均光密度(OPTDM)

6、值分別為0.00168士0.00100，0.15862士0.03988和0.00261士0.00125,正常假手術(shù)組及造模給藥組兩者之間比較在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無差別(F=11.69，q=3.190，P>0.05)，而造模對(duì)照組則與兩者之間均有顯著性差異(q=3.923，P<0.05)。
　　結(jié)論：C組椎間盤細(xì)胞凋亡指數(shù)低于其余各組,與B組比較差異有顯著意義(P<0.05);A組與B、C組比較,盡管細(xì)胞凋亡指數(shù)偏高,但與C組比較差異沒有顯著