喜樹(shù)愈傷組織和葉片中喜樹(shù)堿含量變化研究.pdf

1、本試驗(yàn)探討了誘導(dǎo)喜樹(shù)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基，以及外植體類型和取材季節(jié)對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響，并采用高效液相色譜法(HPLC)對(duì)CPT的提取方法、不同處理?xiàng)l件下愈傷組織中CPT的含量變化，以及葉片中CPT含量的季節(jié)變化進(jìn)行研究，結(jié)果如下：　　1.本試驗(yàn)的最佳色譜條件為：以乙腈/水(V/V=30/70)為流動(dòng)相，流速1.0ml/min，柱溫25℃，進(jìn)樣量20μl，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm?！　?.提取CPT的最佳方法為95％乙醇索氏回流提取，樣品

2、不經(jīng)任何處理，測(cè)得提取液中CPT含量極顯著的高于95％乙醇超聲提取和0.3％NaOH溶液堿法提取?！　?.以嫩葉和帶芽莖段為外植體，在MS+NAA1.0mg/L+IBA1.0mg/L+KT0.1mg/L培養(yǎng)基上，愈傷組織的誘導(dǎo)率高，30d時(shí)統(tǒng)計(jì)可達(dá)90.0％以上，愈傷組織質(zhì)地好、生長(zhǎng)迅速?！　?.SH基本培養(yǎng)基較1/2MS、MS、B5和White4種基本培養(yǎng)基更有利于愈傷組織中喜樹(shù)堿的積累?！　?.最佳取材季節(jié)為7月，在SH+NA

3、A1.0mg/L+IBA1.0mg/L+KT0.1mg/L培養(yǎng)基上，愈傷組織中CPT含量可高達(dá)0.0412‰，愈傷組織誘導(dǎo)率也較高，為82.2％，外植體污染率為18.5％?！　?.NAA和IBA對(duì)CPT的積累有顯著影響，最佳處理濃度均為3.0mg/L，在此濃度下處理10d后，愈傷組織的CPT含量分別高出對(duì)照(CK)25.7％和11.4％，愈傷組織的存活率均能達(dá)到90％以上?！　?.經(jīng)秋水仙堿處理后愈傷組織的存活率和CPT含量均會(huì)迅速