FasL在椎間盤免疫赦免缺失調(diào)控中作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景
　　椎間盤退變是困擾廣大患者的一類骨科常見病,其具體發(fā)病機(jī)制尚未闡明。作為脊柱退行性疾病的根本病理基礎(chǔ),椎間盤退往往可導(dǎo)致椎管狹窄、脊柱節(jié)段不穩(wěn)、骨贅形成、腰腿痛、頸椎病、椎間盤突出及隨之而來的神經(jīng)根、脊髓受壓等等。但目前引起椎間盤退變的確切機(jī)制尚無定論。
　　近年來,椎間盤髓核免疫赦免狀態(tài)與椎間盤退變的關(guān)系受到越來越多的關(guān)注,由于其自身的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),椎間盤作為一個(gè)免疫赦免器官,在椎間盤退變中起著關(guān)鍵的作用。在免疫赦免中

2、,FasL作為免疫調(diào)節(jié)的關(guān)鍵分子,對(duì)于維持椎間盤髓核免疫赦免狀態(tài)的重要意義。
　　本研究旨在闡明 FasL在正常人與退變患者髓核細(xì)胞的表達(dá)情況,以及 FasL在髓核細(xì)胞與巨噬細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞之間的作用。
　　1. FasL在人退變椎間盤和正常椎間盤髓核細(xì)胞中的表達(dá)差異
　　目的:研究FasL在人退變椎間盤和正常椎間盤髓核細(xì)胞中的表達(dá)差異。方法:收集20例椎間盤退變患者的髓核組織,[n=20;平均年齡:43.4±5.

3、4歲(年齡范圍:35-52歲)],以及來源于尸體捐贈(zèng)者的8例正常椎間盤髓核組織,[n=8;平均年齡:41.8±3.6歲(年齡范圍:37-47歲)]。利用Pfirrmann的MRI分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)椎間盤退變程度分級(jí),培養(yǎng)髓核細(xì)胞,并利用 western blotting、RT-PCR以及流式細(xì)胞儀檢測(cè)FasL表達(dá)量。結(jié)果:在蛋白水平上,western blotting檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)FasL在正常椎間盤髓核細(xì)胞中表達(dá)量顯著高于退變椎間盤的髓核組織;R

4、T-PCR檢測(cè)同樣證實(shí)了在mRNA水平上,FasL在正常椎間盤髓核細(xì)胞中表達(dá)量顯著高于退變椎間盤的髓核組織;流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn),正常椎間盤髓核細(xì)胞中,FasL陽性細(xì)胞率為(68.8％±0.072),顯著高于退變患者髓核中的FasL陽性細(xì)胞(35.4%±0.053)。結(jié)論:FasL在正常椎間盤髓核細(xì)胞中表達(dá)顯著高于退變的髓核細(xì)胞。
　　2. FasL在退變髓核細(xì)胞與免疫細(xì)胞共培養(yǎng)模型中的作用
　　目的:研究FasL在退變髓核細(xì)

5、胞與免疫細(xì)胞共培養(yǎng)模型中,對(duì)免疫細(xì)胞的殺傷作用。方法:利用慢病毒轉(zhuǎn)染方法上調(diào)退變髓核細(xì)胞中 FasL的表達(dá)量,采用Transwell插入式小室建立細(xì)胞共培養(yǎng)模型,分別將退變的髓核細(xì)胞、上調(diào) FasL的退變髓核細(xì)胞與自體巨噬細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞共培養(yǎng),48小時(shí)后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)共培養(yǎng)模型中自體巨噬細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的凋亡率。結(jié)果:患者自體巨噬細(xì)胞與自體退變的髓核細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí),巨噬細(xì)胞凋亡率為6.5%±0.0075,顯著低于自體巨噬細(xì)胞與