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1、目的:觀察經(jīng)典Wnt/β-catenin以及骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)信號(hào)通路對(duì)大鼠骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖以及向成骨方向分化的影響。
方法:應(yīng)用密度梯度離心聯(lián)合貼壁篩選法分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并分成四組:對(duì)照組,Wnt組,BMP組,Wnt3a和BMP-2聯(lián)合組,在不同時(shí)間點(diǎn)用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(CCK-8)法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性,堿性磷酸酶(ALP)活性定量測(cè)定、Von Kossa染色觀察細(xì)胞向成骨分化情況和基質(zhì)礦化程
2、度。反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)成骨特異性標(biāo)志物表達(dá)。
結(jié)果:培養(yǎng)第7d,CKK-8測(cè)吸光度值聯(lián)合組為0.845,Wnt組為0.738,明顯高于對(duì)照組0.409(P<0.05)。培養(yǎng)第6d和第12d,ALP活性吸光度值聯(lián)合組為63.8和144.3,BMP-2組為40.8和104.1,均明顯高于對(duì)照組7.3和18.9(P<0.05)。培養(yǎng)14d后,聯(lián)合組骨鈣素mRNA表達(dá)量高于對(duì)照組,而Runx2及Osterix
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