糖尿病足感染傷口滲液中基質(zhì)金屬蛋白酶2和金屬蛋白酶2組織抑制因子的定量研究及強(qiáng)力霉素的治療作用.pdf

1、背景和目的:基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是一類含Zn2+的內(nèi)源性蛋白水解酶，刪Ps能降解除多糖以外的所有細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）成分，金屬蛋白酶組織抑制因子（TIMPs）是其內(nèi)源性抑制因子，主要功能是特異性抑制MMPs。二者協(xié)同作用，維持動(dòng)態(tài)平衡，在各種生理和病理過程中發(fā)揮重要作用。研究證實(shí)，基質(zhì)金屬蛋白酶在時(shí)間和空間上有控制的表達(dá)對(duì)創(chuàng)傷愈合與組織修復(fù)必不可少。 四環(huán)素族藥物作為一類廣譜抗生素被廣泛應(yīng)用于臨床，但近期的研究發(fā)現(xiàn)它還是一

2、種能影響細(xì)胞多種功能的藥物，具有較強(qiáng)的對(duì)MMPs的抑制作用。進(jìn)一步的研究證明脫氧羥基四環(huán)素（強(qiáng)力霉素）在一定濃度范圍對(duì)動(dòng)物模型或人體組織細(xì)胞可降低MMPs的表達(dá)，減少M(fèi)MPs的合成，抑制MMPs的活性。 本研究探討基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）及金屬蛋白酶2組織抑制因子（TIMP-2）在糖尿病足感染創(chuàng)面滲液中的表達(dá)，旨在闡明其表達(dá)水平變化與糖尿病足感染創(chuàng)面的內(nèi)在聯(lián)系，并通過MMP-2/TIMP-2比值的變化，進(jìn)一步闡明MMPs與

3、TIMPs表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)失衡與糖尿病足潰瘍愈合機(jī)制的相關(guān)性。同時(shí)應(yīng)用強(qiáng)力霉素對(duì)糖尿病足潰瘍進(jìn)行局部外用治療，觀察其治療效果，為糖尿病足潰瘍的治療提供新的方法。 材料與方法: 1．糖尿病足潰瘍并感染患者20例（DF組），符合1999年WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，均為2型糖尿病，按Wagnar分類標(biāo)準(zhǔn)在Ⅱ級(jí)8例，Ⅲ級(jí)12例。其患肢踝肱比（ABI）在0．4-0．9之間，糖尿病足部潰瘍的病程均在4周以上，排除下肢靜脈性潰瘍，無肝、腎功

4、能不全及免疫缺陷病。行潰瘍局部分泌物或深部壞死組織細(xì)菌培養(yǎng)證實(shí)合并感染：?jiǎn)我患?xì)菌感染者15例，混合細(xì)菌感染者5例。對(duì)照組分為糖尿病非感染手術(shù)患者10例（DM組），均符合1999年WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，均為2型糖尿??；非糖尿病非感染手術(shù)患者10例（N組），患者的年齡、性別與糖尿病足潰瘍并感染組基本匹配，均多次行手術(shù)創(chuàng)面局部分泌物細(xì)菌培養(yǎng)排除合并感染。 2．標(biāo)本收集：收集糖尿病足感染傷口滲液及手術(shù)創(chuàng)面引流液。 3．采用雙抗體

5、夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定創(chuàng)面滲液樣本中MMP-2、TIMP-2的濃度，并計(jì)算各樣本MMP-2/TIMP-2的比值。比較三組之間的差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4．以外敷生理鹽水為對(duì)照，在合并有細(xì)菌感染的潰瘍局部加入強(qiáng)力霉素治療（強(qiáng)力霉素藥物濃度為100mg/L），觀察比較兩組的肉芽組織出現(xiàn)時(shí)間（GT）及潰瘍愈合時(shí)間（HT）是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)果： 1．糖尿病足潰瘍合并感染組滲液中MMP-2的濃度為8

6、3．58±15．09 ng/ml，TIMP-2的濃度為12．88±2．59 ng/ml，MMP-2/TIMP-2比值為6．84±2．33；糖尿病非感染手術(shù)創(chuàng)面組滲液中MMP-2的濃度為32．18±4．29 ng/ml，TIMP-2的濃度為30．71±3．91 ng/ml，MMP-2/TIMP-2比值為1．06±0．20；非糖尿病非感染手術(shù)創(chuàng)面組滲液中MMP-2的濃度為21．51±3．62 ng/ml，TIMP-2的濃度為20．74±2．

7、72 ng/ml，MMP-2/TIMP-2比值為1．05±0．23。糖尿病足潰瘍合并感染組滲液中MMP-2的濃度與對(duì)照組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；三組之間MMP-2濃度的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示DF組滲液中MMP-2濃度較DM組升高，同時(shí)DM組MMP-2濃度較N組升高。糖尿病足潰瘍合并感染組滲液中TIMP-2的濃度與對(duì)照組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；三組之間TIMP-2濃度的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示DM組滲液中TIMP-2濃度較N組升高，同時(shí)

8、N組TIMP-2濃度較DF組升高。糖尿病足潰瘍合并感染組滲液中MMP-2/TIMP-2比值與對(duì)照組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；DF組MMP-2/TIMP-2比值與其余兩組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示DF組MMP-2/TIMP-2比值較其余兩組顯著升高；而DM組與N組之間兩兩比較，其差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2．糖尿病足潰瘍合并感染組中作分組比較：?jiǎn)我桓腥窘MMMP-2的濃度為79．26±13．77 ng/ml，TIMP-2的濃度為12

9、．98±2．80 ng/ml，MMP-2/TIMP-2比值為6．51±2．48；混合感染組MMP-2的濃度為96．51±11．82 ng/ml，TIMP-2的濃度為12．58±2．09 ng/ml，MMP-2/TIMP-2比值為7．85±1．62。單一感染組與混合感染組間MMP-2的濃度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示混合感染組MMP-2的濃度較單一感染組升高；兩組間TIMP-2的濃度及MMP-2/TIMP-2比值差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

10、3．糖尿病足潰瘍合并感染組中作分組比較：Ⅱ級(jí)潰瘍組MMP-2的濃度73．0±8．56ng/ml，TIMP-2的濃度為13．56±2．82 ng/ml，MMP-2/TIMP-2比值為5．59±1．33；Ⅲ級(jí)潰瘍組iMP-2的濃度為90．62±18．54 ng/ml，TIMP-2的濃度為12．43±2．45ng/ml，MMP-2/TIMP-2比值為7．68±2．53。Ⅱ級(jí)潰瘍組與Ⅲ級(jí)潰瘍組間MMP-2的濃度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示Ⅲ級(jí)潰瘍組

11、MMP-2的濃度較Ⅱ級(jí)潰瘍組升高；兩組間MMP-2/TIMP-2比值的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示Ⅲ級(jí)潰瘍組MMP-2/TIMP-2比值較Ⅱ級(jí)潰瘍組升高；兩組間TIMP-2的濃度差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4．強(qiáng)力霉素治療組中，Wagnar分級(jí)Ⅱ、Ⅲ級(jí)患者肉芽組織出現(xiàn)時(shí)間（GT）分別為：3．5±1．3天及4．8±1．5天；潰瘍愈合時(shí)間（HT）分別為：22．8±3．3天及25．2±4．4天；Ⅱ級(jí)+Ⅲ級(jí)患者潰瘍?nèi)庋拷M織出現(xiàn)時(shí)間（GT）及潰瘍愈

12、合時(shí)間（HT）分別為：4．3±1．5天及24．2±4．0天。生理鹽水對(duì)照組中，Wagnar分級(jí)Ⅱ、Ⅲ級(jí)患者潰瘍?nèi)庋拷M織出現(xiàn)時(shí)間（GT）分別為：6．3±1．3天及7．3±1．5天；潰瘍愈合時(shí)間（HT）分別為：38．3±3．4天及46．5±5．0天。Ⅱ級(jí)+Ⅲ級(jí)患者潰瘍?nèi)庋拷M織出現(xiàn)時(shí)間（GT）及潰瘍愈合時(shí)間（HT）分別為：6．9±1．5天及43．2±6．0天。強(qiáng)力霉素治療組與對(duì)照組的GT、HT差異有顯著性意義；提示強(qiáng)力霉素治療組潰瘍部位肉芽組