牡蠣活性肽降血糖和抑制ACE作用研究.pdf

1、第一部分牡蠣活性肽的制備和營(yíng)養(yǎng)成分分析 目的：制備牡蠣活性肽及分析活性肽的營(yíng)養(yǎng)成分。 方法：牡蠣酶解液經(jīng)Sephadex G-50柱層析分離，收集牡蠣活性肽，冷凍干燥；采用葡聚糖凝膠層析法測(cè)定活性肽的相對(duì)分子量分布范圍，用HPLC測(cè)定牛磺酸含量，用氨基酸分析儀測(cè)定氨基酸總量，用蒽醌法測(cè)定糖原含量，用雙縮脲法測(cè)定蛋白含量。 結(jié)果：用Sephadex G-50層析能達(dá)到較好的分離效果：牡蠣活性肽其相對(duì)分子量主要集中在

2、5kD以下，?；撬岷繛?.33％，氨基酸總量為44.30％，糖原含量為26.12％，蛋白含量為27.16％. 結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便，分離效果好，得到的牡蠣活性肽含有人體所需的各種氨基酸，并含有較高的糖原和蛋白質(zhì)，可以作為功能性食品進(jìn)一步深入開(kāi)發(fā)利用。 第二部分牡蠣活性肽降血糖作用研究 目的：研究牡蠣活性肽的降糖效果及可能的作用機(jī)制。 方法：將昆明種健康小鼠220只，雌雄各半，分成正常實(shí)驗(yàn)、干預(yù)實(shí)驗(yàn)和治療實(shí)驗(yàn)

3、。正常實(shí)驗(yàn)，設(shè)正常對(duì)照組(NC)和牡蠣活性肽低、中、高劑量組；干預(yù)實(shí)驗(yàn)設(shè)NC、模型對(duì)照組(MC)、牡蠣活性肽低、中、高劑量組；治療實(shí)驗(yàn)，分為NC、MC、陽(yáng)性藥物對(duì)照組和牡蠣活性肽低、中、高劑量組。采用腹腔注射四氧嘧啶200mg/kg(按小鼠體重)造糖尿病模型小鼠，NC和MC灌胃生理鹽水，牡蠣活性肽低、中、高劑量組按0.5g/kg、1g/kg、2g/kg(按小鼠體重)灌胃，陽(yáng)性藥物二甲雙胍按0.5g/kg灌胃。實(shí)驗(yàn)結(jié)束，小鼠稱重，經(jīng)眼球取

4、血用葡萄糖氧化酶法測(cè)空腹血糖，處死后取出胸腺、脾臟、肝臟和腎臟稱重并計(jì)算臟器指數(shù)，通過(guò)胰腺做病理切片觀察其形態(tài)學(xué)改變，采用酶法、紫外分光光度法測(cè)定甘油三酯、膽固醇、高密度脂蛋白、丙二醛、羥自由基、血尿素氮、血清鈣等生化指標(biāo)。 結(jié)果：正常實(shí)驗(yàn)，牡蠣活性肽各組小鼠的血糖、體重、肝臟指數(shù)及腎臟指數(shù)與正常對(duì)照組比較沒(méi)有明顯差異，BPO高劑量組的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)較正常對(duì)照組有差異。干預(yù)實(shí)驗(yàn)，模型對(duì)照組和BPO各劑量組小鼠的胸腺指數(shù)和脾指

5、數(shù)降低，BPO高劑量組小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)與模型對(duì)照組相比均有顯著性差異(P<0.05)，牡蠣活性肽中、高劑量組小鼠的血糖水平均顯著性低于模型對(duì)照組(P<0.05)。治療實(shí)驗(yàn)，牡蠣活性肽中、高劑量組小鼠血糖顯著低于模型對(duì)照組(P<0.01)，接近藥物對(duì)照組水平，且與模型對(duì)照組相比，各劑量組提高小鼠高密度脂蛋白、血清鈣的含量，降低TG、CHO水平；中、高劑量組顯著提高小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)(P<0.05)，極顯著提高機(jī)體清除羥自由基的能

6、力(P<0.01)，并極顯著降低血清MDA、BUN含量(P<0.01).病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，牡蠣活性肽組小鼠的胰島損害程度較模型組輕，高劑量組小鼠的胰島有較大程度的改善，二甲雙胍組有明顯改善。 結(jié)論：1.牡蠣活性肽對(duì)正常小鼠的血糖、體重、器官重量無(wú)明顯影響。 2.牡蠣活性肽能阻抑四氧嘧啶誘導(dǎo)的小鼠血糖，提示它對(duì)四氧嘧啶誘導(dǎo)糖尿病小鼠的形成、胰島的損傷有一定的保護(hù)作用。 3.牡蠣活性肽能降低高血糖小鼠的血糖水平，表明牡

7、蠣活性肽具有促進(jìn)胰島組織修復(fù)和恢復(fù)其分泌的功能。 4.牡蠣活性肽可降低血清MAD、TG、CHO、BUN，并能提高高血糖小鼠的胸腺和脾臟指數(shù)，提示牡蠣活性肽具有調(diào)節(jié)血脂，清除自由基、提高機(jī)體抗氧化能力和增強(qiáng)免疫功能的作用。 第三部分： 目的：酶解牡蠣提取ACE抑制肽及活性測(cè)定。 方法：應(yīng)用鹽析、Sephadex G-100凝膠層析和DEAE Sepharose CL-6B離子交換法從豬肺中分離純化

8、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)；以新鮮牡蠣為原料，運(yùn)用酶解法制備牡蠣ACE抑制肽，從牛胰蛋白酶、堿性蛋白酶、動(dòng)物蛋白水解酶中篩選出最佳的酶解條件，經(jīng)SephadexG-25分離酶解液；采用RP-HPLC法測(cè)定牡蠣ACE抑制肽的抑制活性。 結(jié)果：分離純化的ACE酶達(dá)到了電泳純，可用于HPLC的測(cè)定；篩選出最佳的酶解條件是：用堿性蛋白酶，pH為9.0，酶解4小時(shí)，酶解溫度為55℃；分離得到的四個(gè)組分(0.48mg/ml)，ACE抑制率分