BMP-15對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥患者卵母細(xì)胞質(zhì)量的影響.pdf

1、目的：⑴明確骨形態(tài)發(fā)生蛋白-15(Bone Morphogenetic Protein-15 BMP-15)在子宮內(nèi)膜異位癥患者和單純男性重度少弱精不孕或者單純輸卵管梗阻無(wú)超聲下可見(jiàn)積水患者中表達(dá)量的差異,以及BMP-15對(duì)卵母細(xì)胞質(zhì)量的影響以及在不孕癥中所起的作用。⑵子宮內(nèi)膜異位癥患者卵母細(xì)胞的卵丘顆粒細(xì)胞凋亡率對(duì)卵母細(xì)胞質(zhì)量的影響及其作用途徑。
　　 方法：①選取2009年6月至2010年11月于浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院

2、生殖中心就診的不孕患者,經(jīng)腹腔鏡檢查或卵巢囊腫穿刺術(shù)確診為子宮內(nèi)膜異位癥的85例患者納入內(nèi)異癥組,單純男性重度少弱精不孕或者單純輸卵管梗阻無(wú)超聲下可見(jiàn)積水的88例患者為對(duì)照組。②臨床所有入選患者均記錄年齡、獲卵數(shù)、正常受精數(shù)、正常卵裂數(shù)、優(yōu)胚數(shù),并隨訪臨床妊娠情況。③取卵時(shí)收集入選患者不含血的卵泡液于EP管中,離心去除細(xì)胞等有形成分,采用Western blot方法測(cè)定內(nèi)異癥組和對(duì)照組患者卵泡液中BMP-15的表達(dá)量。④留取取卵日剝除的

3、成熟卵母細(xì)胞周?chē)穆亚痤w粒細(xì)胞于EP管中,離心棄上清；加入透明質(zhì)酸酶處理顆粒細(xì)胞后,FITC及PI雙染色顆粒細(xì)胞；避光處理后,采用流式細(xì)胞儀分析兩組患者卵丘顆粒細(xì)胞的凋亡率。⑤留取取卵日剝除的成熟卵母細(xì)胞周?chē)穆亚痤w粒細(xì)胞于EP管中,離心棄上清,將顆粒細(xì)胞保存于-80℃冰箱內(nèi),待實(shí)驗(yàn)日解凍所有顆粒細(xì)胞,采用Trizol法分別提取每例標(biāo)本的總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,采用Real time PCR法檢測(cè)顆粒細(xì)胞糖代謝基因PFKP mRNA

4、及LDHA mRNA的表達(dá)量。
　　 結(jié)果：內(nèi)異癥患者85例,平均獲卵數(shù)(8.2±5.6)個(gè),優(yōu)胚率(37.6±33.2)％,而對(duì)照組患者88例,平均獲卵數(shù)及優(yōu)胚率分別為(11.9±5.8)個(gè),(48.0±31.4)％,內(nèi)異癥組患者平均臨床獲卵數(shù)及優(yōu)胚率均較對(duì)照組低,兩者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性(P<0.05)。內(nèi)異癥組獲卵率、受精率及卵裂率分別為(72.4±28.3)％、(65.3±24.7)％、(98.8±5.7)％；對(duì)照組獲卵率、

5、受精率及卵裂率分別為(73.4±22.9)％、(67.4±21.0)％、(99.4±5.4)％,兩組患者獲卵率、受精率及卵裂率差異無(wú)顯著性(P>0.05)。85例內(nèi)異癥組患者中有33例獲得臨床妊娠,臨床妊娠率為38.8％；88例對(duì)照組中未受精有2例,4例因OHSS取消移植,1例因子宮內(nèi)膜息肉取消移植,1例因子宮肌瘤取消移植,1例因內(nèi)膜薄取消移植,4例因孕酮升高未移植。剩余75例患者中有40例獲得臨床妊娠,臨床妊娠率為53.5％.內(nèi)異組患

6、者臨床妊娠率較對(duì)照組低14.7％,但差異無(wú)顯著性(P=0.067)。采用western-blot法檢測(cè)卵泡液中BMP-15的表達(dá)量,13例內(nèi)異癥組患者卵泡液中BMP-15表達(dá)量(0.67±0.18),13例對(duì)照組患者卵泡液中BMP-15表達(dá)量為(0.94±0.33),內(nèi)異癥組較對(duì)照組低,兩者相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性(P<0.05)。流式細(xì)胞儀分析6例內(nèi)異組患者卵丘顆粒細(xì)胞早期凋亡率為(37.82±15.81)％,6例對(duì)照組患者卵丘顆粒細(xì)胞早

7、期凋亡率為(8.85±5.58)％,兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性(P<0.05)。15例內(nèi)異癥組患者顆粒細(xì)胞PFKP mRNA的相對(duì)量為(1.22±0.63),LDHA mRNA的相對(duì)量為(1.22±0.60),12例對(duì)照組患者顆粒細(xì)胞PFKP mRNA的相對(duì)量為(0.96±0.19),LDHA mRNA的表相對(duì)量為(0.97±0.29),內(nèi)異癥組患者顆粒細(xì)胞PFKP mRNA的相對(duì)量和LDHA mRNA的相對(duì)量均較對(duì)照組高,但兩者之間差異