抗生素誘導(dǎo)小鼠小腸菌群失衡對(duì)樹(shù)突細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的影響.pdf

1、目的:
　　 通過(guò)分析小鼠小腸菌群失衡前后小腸中樹(shù)突細(xì)胞的形態(tài)、數(shù)量、亞型及功能的變化，探討菌群失衡對(duì)小腸中樹(shù)突細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能的影響。
　　 方法:
　　 1.抗生素誘導(dǎo)小鼠小腸菌群失衡的菌群檢測(cè):實(shí)驗(yàn)分為兩組，正常對(duì)照組與菌群失衡組。正常對(duì)照組小鼠灌服無(wú)菌水，菌群失衡組小鼠灌服400mg/ml頭孢曲松鈉，每次0.2ml，每日2次，間隔6h，連續(xù)8d;分析小鼠小腸菌群，建立小鼠小腸菌群失衡模型。
　　

2、2.小鼠小腸樹(shù)突細(xì)胞的分離、純化
　　 (1)應(yīng)用EDTA震蕩法去上皮與Ⅳ型膠原酶消化法制備小腸粘膜單細(xì)胞懸液。
　　 (2)應(yīng)用CD11c免疫磁珠法進(jìn)行小鼠小腸樹(shù)突細(xì)胞的分離、純化。
　　 3.菌群失衡對(duì)腸道樹(shù)突細(xì)胞的影響
　　 (1)透射電鏡技術(shù)觀察小鼠小腸粘膜中樹(shù)突細(xì)胞形態(tài)的變化。
　　 (2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠小腸粘膜中樹(shù)突細(xì)胞上CD11c、CD11b、CD8a、MHC-Ⅱ、CD86、CD

3、80、CD40、CD83、CD205的變化。
　　 (3)RT-PCR技術(shù)檢測(cè)小鼠小腸樹(shù)突細(xì)胞上IL-10、1L-12mRNA水平的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.抗生素誘導(dǎo)小鼠小腸菌群失衡的菌群檢測(cè):通過(guò)抗生素頭孢曲松鈉的誘導(dǎo)可以建立穩(wěn)定的小鼠小腸菌群失衡模型。菌群失衡后小鼠小腸菌群數(shù)量及種類(lèi)明顯減少。雙歧桿菌、類(lèi)桿菌、梭桿菌、韋榮球菌、葡萄球菌的數(shù)量幾乎降至零。
　　 2.小鼠小腸粘膜樹(shù)突細(xì)胞的分離、

4、純化:經(jīng)免疫磁珠分選系統(tǒng)分離純化的樹(shù)突細(xì)胞，光學(xué)顯微鏡下可觀察到小腸中分離的樹(shù)突細(xì)胞有大小不等的突起，由于多聚甲醛的固定作用，樹(shù)突大多不明顯。膠原酶消化與免疫磁珠分選后，經(jīng)過(guò)兩根MS柱純度可達(dá)到55％-60％，連續(xù)多根柱子后純度可更高。
　　 3.菌群失衡對(duì)小腸樹(shù)突細(xì)胞的影響
　　 (1)對(duì)小腸樹(shù)突細(xì)胞的形態(tài)的影響:固有膜正常對(duì)照組樹(shù)突細(xì)胞有大小不等的偽足，細(xì)胞邊緣清晰，細(xì)胞核不規(guī)則。菌群失衡組與正常對(duì)照組比較樹(shù)突細(xì)胞偽

5、足變短，細(xì)胞邊緣模糊，不規(guī)則。細(xì)胞質(zhì)變小。
　　 (2)對(duì)小腸樹(shù)突細(xì)胞的結(jié)構(gòu)的影響:菌群失衡后小腸粘膜CD11c樹(shù)突細(xì)胞的數(shù)量較正常對(duì)照組顯著增高(Ｐ=0.0001)。CD11c樹(shù)突細(xì)胞兩種亞群較正常對(duì)照組均無(wú)明顯變化CD11c+CD11b+(P=0.773)，CD11c+CD8a+(P=0.235)。
　　 (3)對(duì)小腸樹(shù)突細(xì)胞的功能的影響:菌群失衡后小鼠小腸CD11c樹(shù)突細(xì)胞上表達(dá)的CD205未見(jiàn)明顯變化(P=0.8

6、16)。CD11c樹(shù)突細(xì)胞上表達(dá)的MHC-Ⅱ、CD86、CD80、CD40均顯著降低，其P值分別為0.0001、0.030、0.036、0.008。CD11c+樹(shù)突細(xì)胞上表達(dá)的CD83顯著降低(P=0.003)。CD11c樹(shù)突細(xì)胞上IL-10表達(dá)明顯升高，IL-12表達(dá)明顯降低。
　　 結(jié)論:
　　 1.抗生素頭孢曲松鈉干擾腸道菌群，可建立小鼠小腸菌群失衡模型。
　　 2.利用MACS系統(tǒng)可對(duì)小腸粘膜樹(shù)突細(xì)胞進(jìn)行