膜片鉗和電化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)在血竭單體化學(xué)成分龍血素B研究中的應(yīng)用.pdf

1、對(duì)中藥和天然藥物的研究，特別是對(duì)其進(jìn)行藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)理研究是中藥現(xiàn)代化進(jìn)程中的關(guān)鍵問題之一，也是揭示中藥的科學(xué)本質(zhì)、開發(fā)創(chuàng)新藥物的基礎(chǔ)性工作。 血竭是我國的傳統(tǒng)名貴中藥之一，在防止心血管疾病、治療風(fēng)濕疼痛癥、抗癌等方面開發(fā)利用潛力大。然而，目前對(duì)血竭藥理作用機(jī)理的研究大多集中在其活血化淤方面，為數(shù)不多的血竭鎮(zhèn)痛作用機(jī)理的研究也與其抗菌消炎止痛有關(guān)。由于血竭是一種中藥，其化學(xué)成分復(fù)雜，要想從分子水平上來解釋它的各種藥理效應(yīng)，

2、理應(yīng)闡明它的藥效物質(zhì)。針對(duì)當(dāng)前中藥現(xiàn)代化進(jìn)程中中藥藥理研究普遍存在的問題，即中藥藥理的研究對(duì)象到底是作為整體的中藥還是單個(gè)化學(xué)成分；怎樣更好的表達(dá)、分析和檢測中藥的藥理效應(yīng)和它的有效成分的藥理效應(yīng)；系統(tǒng)研究了傳統(tǒng)名貴中藥血竭中的一種重要成分――龍血素B。運(yùn)用不同的研究手段分析了血竭產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用的藥理機(jī)制及其藥理效應(yīng)，將中藥血竭本身與其化學(xué)成分的研究統(tǒng)一起來，確定了血竭干預(yù)痛覺信息中樞傳入的藥效物質(zhì)并且探討了這種藥效物質(zhì)在人工模擬生物膜―

3、―水/1,2二氯乙烷界面上的轉(zhuǎn)移機(jī)制，并將此研究作為中藥現(xiàn)代化中有效成分確定和藥理機(jī)制深入研究的一個(gè)例證。 本文首先應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)觀察了龍血素B對(duì)小鼠三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞河豚毒素敏感型(TTX-S)和河豚毒素不敏感型(TTX-R)兩類電壓門控鈉通道電流的影響。結(jié)果顯示，龍血素B對(duì)兩種類型鈉通道電流均有濃度依賴性抑制，并且影響鈉通道電流的失活過程，而對(duì)其激活和復(fù)活過程無明顯的影響，這就表明，這種抑制作用發(fā)生在鈉通道的失活態(tài)而非激活

4、態(tài)。這個(gè)結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)室以前對(duì)血竭所作的研究結(jié)果相比具有一致性，充分說明了龍血素B是血竭調(diào)制電壓門控鈉通道電流的有效成分。 為了進(jìn)一步確定血竭產(chǎn)生上述鎮(zhèn)痛效應(yīng)的藥效物質(zhì)――龍血素B的藥理機(jī)制，本文又采用電化學(xué)方法對(duì)其藥效物質(zhì)龍血素B進(jìn)行循環(huán)伏安研究，進(jìn)而對(duì)其電化學(xué)性質(zhì)以及在液/液界面的轉(zhuǎn)移機(jī)制進(jìn)行探討。由于在生理pH條件下，許多具有生物活性的化合物或者藥物通常是可以離子化的，而且他們可以以中性形式或者離子形式存在于該pH環(huán)境中,或

5、者兩種形式共存于該pH環(huán)境中。通過對(duì)這些藥物在油/水界面的循環(huán)伏安研究可以得到有關(guān)這些藥物的生物學(xué)意義的物理化學(xué)特性，比如藥物的中性形式和離子形式在有機(jī)相和水相間的分配系數(shù)。結(jié)果表明，中性的酸性藥物可以通過界面質(zhì)子化反應(yīng)來降低質(zhì)子的吉布斯自由能，即通過兩種機(jī)理(TIC和ACT)來實(shí)現(xiàn)中性藥物從水相進(jìn)入到膜相中。因?yàn)樯矬w系中質(zhì)子的濃度是被嚴(yán)格控制的，這兩個(gè)機(jī)理在藥物學(xué)研究中具有重要的意義。另外，通過測量藥物在液/液界面(本文中的液液界面

6、是水/1，2二氯乙烷)體系中的分配系數(shù)，使我們能更好地理解可質(zhì)子化藥物是如何加速水相中的質(zhì)子向其他介質(zhì)(細(xì)胞膜)轉(zhuǎn)移的，這就為藥物研究提供了一種解釋生物環(huán)境中pH調(diào)節(jié)劑的行為有效的方法。 綜上所述，建立中藥藥效物質(zhì)的現(xiàn)代化研究――有效成分的確定和對(duì)其有效成分的進(jìn)一步探討，并將此結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)室以前的結(jié)果相比較，確定龍血素B是血竭調(diào)制TG細(xì)胞電壓門控性鈉通道電流，產(chǎn)生頭面部鎮(zhèn)痛效應(yīng)的主要有效成分。為了進(jìn)一步的對(duì)這種有效成分進(jìn)行深入的

7、考察，采用電化學(xué)循環(huán)伏安法對(duì)其進(jìn)行液/液界面上轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究。通過不同pH值條件下的循環(huán)伏安圖計(jì)算出龍血素B在水/1,2－二氯乙烷界面上轉(zhuǎn)移的標(biāo)準(zhǔn)離子分配系數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)離子轉(zhuǎn)移電位和標(biāo)準(zhǔn)吉布斯自由能等，據(jù)此可以判定藥物是以哪種形式在液/液界面上發(fā)生轉(zhuǎn)移反應(yīng)的以及這種藥物親脂性的大小。這種藥物轉(zhuǎn)移機(jī)理的研究對(duì)于更好的理解液/液界面的結(jié)構(gòu)和藥物的釋放以及藥物的藥理、藥效作用都具有非常重要的意義。 本研究不僅有利于中藥血竭的進(jìn)一步推廣，而