頜骨骨纖維異常增殖癥及骨化性纖維瘤一氧化氮合酶的表達(dá)及病因探討.pdf

1、一氧化氮(nitric oxide，NO)作為一種多效的信號分子參與調(diào)節(jié)人體內(nèi)多種細(xì)胞的功能，其生物合成主要受一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)的調(diào)節(jié)。骨組織中存在著人類三種NOS亞型，即神經(jīng)元NOS(nNOS)，內(nèi)皮型NOS(eNOS)，誘導(dǎo)型NOS(iNOS)。雖然各亞型擁有相同的催化活性，但編碼它們的基因各不相同，在各種組織中的分布也不相同，說明它們的功能也不盡相同。各亞型在成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞中的不

2、同表達(dá)不僅可以反應(yīng)出骨組織的生長狀況，同時(shí)也對骨組織的正常生長發(fā)育和代謝平衡有著重要的影響作用。 目前許多研究正試圖闡明各亞型在生理、病理狀態(tài)下對骨組織的影響。早期有學(xué)者將分離出的成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞分別加以培養(yǎng)，并在培養(yǎng)基中加入各種成份來觀察成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞的活動，分別測定各NOS亞型在兩種骨細(xì)胞上的表達(dá)，推測其作用。近期有學(xué)者利用靶向斷裂NOS基因，來研究各NOS亞型對大鼠骨發(fā)育的影響，檢測大鼠骨的變化，以了解各NOS亞型在

3、生物體內(nèi)的作用。還有學(xué)者通過測定人類骨疾病中各NOS亞型的表達(dá)及NO供體、NOS抑制劑對骨的生長狀況的影響，來推測NOS各亞型對人類骨細(xì)胞的作用。但到目前為止，NOS各亞型對骨細(xì)胞的作用在很多研究中仍存在著矛盾，其作用機(jī)理仍未能完全弄清，觀測NOS在各種骨疾病中的表達(dá)仍是了解其功能的重要途徑。 骨纖維異常增殖癥(Fibrous dysplasia of bone，F(xiàn)D)是一種骨髓和網(wǎng)狀骨被纖維結(jié)締組織和不規(guī)則病變所代替的骨纖維性

4、疾病，常于青少年時(shí)期發(fā)病，病程發(fā)展緩慢。有些患者青春期后可停止發(fā)展，但也可終身緩慢進(jìn)行。病損處與正常骨無明顯分界。骨祖細(xì)胞向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化受阻是FD形成的主要原因。骨化性纖維瘤(OSSifying fibroma of bone，oF)是一種真性腫瘤，病因尚不清楚，常發(fā)生于幼童，病損處與正常組織有明顯的邊界。 FD與OF比較，兩種病變均存在骨的結(jié)構(gòu)及形態(tài)改變，在組織病理學(xué)上，兩者都是纖維間質(zhì)中有不規(guī)則的骨小梁形成。不同的是，F(xiàn)D是

5、纖維性骨，不形成板狀骨，同時(shí)骨小梁呈多形態(tài)，在小梁邊緣無骨母細(xì)胞和破骨細(xì)胞。O F的骨小梁有板狀骨形成，小梁邊緣有骨母細(xì)胞被覆及不等量的破骨細(xì)胞，目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為FD和OF二者均為纖維——骨病變，均屬骨發(fā)育障礙，這是否與骨發(fā)育障礙的程度、阻滯的階段不同有關(guān)，尚須證實(shí)。 OF與FD在臨床表現(xiàn)和病理特征方面有許多相似與不同之處，比較兩種疾病病損骨中NOS三種亞型在成骨細(xì)胞(骨母細(xì)胞)與破骨細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的不同，有利于進(jìn)一步了解NOS各亞

6、型對骨細(xì)胞的作用，也為尋找FD與OF的發(fā)病機(jī)制及治療方法提供可能。目前這方面的研究情況國內(nèi)外尚未見報(bào)道。 目的：本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測NOS三種亞型在FD與OF病變組織中成骨細(xì)胞(骨母細(xì)胞)、破骨細(xì)胞上的表達(dá)情況，探索NOS各亞型對骨細(xì)胞的分化、骨的代謝的影響，尋找NOS在骨代謝平衡中的作用；為了解FD與OF的發(fā)病機(jī)制及為尋找治療FD與OF的新方法提供理論依據(jù)。 方法：標(biāo)本主要來源于中山醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院病理科保

7、存、外科手術(shù)切除的頜面部OF及FD組織石蠟包埋標(biāo)本，其中OFl4例，F(xiàn)D20例。用SP免疫組織化學(xué)染色法檢測OF和FD中的成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞、纖維母細(xì)胞中NOS三亞型的表達(dá)。陽性染色定位于細(xì)胞漿，呈棕黃色。本研究結(jié)果均為計(jì)數(shù)資料，對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行四格表資料的卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異有顯著性，P<0.01為差異有明顯顯著性。 結(jié)果：①eNOS在OF、FD中的表達(dá)14例OF和20例FD中eNOS在骨母細(xì)胞、破骨細(xì)胞上的表達(dá)，結(jié)果顯

8、示：所有病例無論成骨細(xì)胞還是破骨細(xì)胞中都未發(fā)現(xiàn)eNOS陽性表達(dá)。纖維細(xì)胞中也未出現(xiàn)eNOS的陽性表達(dá)。只有在兩種疾病中病變區(qū)內(nèi)的血管壁上可見eNOS的陽性表達(dá)。②nNoS在OF、FD中的表達(dá) 14例OF和20例FD中nNOS在骨母細(xì)胞、破骨細(xì)胞上的表達(dá)，結(jié)果顯示：14例OF中兩例破骨細(xì)胞nNOS表達(dá)陽性，陽性率為14.3％；全部FD中破骨細(xì)胞nNOS均為陰性。一例OF、一例FD中骨母細(xì)胞nNOS表達(dá)陽性，陽性率分別為7.14％和5％。

9、纖維細(xì)胞中未出現(xiàn)nNOS的陽性表達(dá)。③iNOS在OF、FD中破骨細(xì)胞上的表達(dá)14例OF和20例FD，可見iNOS在破骨細(xì)胞上存在陽性表達(dá)。其中14例OF中破骨細(xì)胞9例iNOS表達(dá)為陽性，5例為陰性，陽性率為64.3％；20例FD中破骨細(xì)胞5例iNOS表達(dá)為陽性，15例為陰性，陽性率為25.0％。經(jīng)x2檢驗(yàn)，iNOS在OF與FD中破骨細(xì)胞上的表達(dá)有顯著性差異(p<0.05)，在前者上的表達(dá)率較高。④iNOS在OF、FD中骨母細(xì)胞上的表達(dá)1

10、4例oF中，12例可檢出骨母細(xì)胞，檢出率為85.7％；20例FD中，只有4例可檢出骨母細(xì)胞，檢出率為20％。在可檢出骨母細(xì)胞的12例OF病例中有3例iNOS表達(dá)陽性，陽性率為25.0％；可檢出骨母細(xì)胞的4例FD病例中iNOS表達(dá)全部為陽性，陽性率為100.0％。經(jīng)x2檢驗(yàn)，p<0.05，說明iNOS在0F與FD骨母細(xì)胞上的表達(dá)具有顯著性差異，在后者上的表達(dá)率高。⑤iNOS在OF、FD中纖維母細(xì)胞上的表達(dá)兩種疾病病變區(qū)內(nèi)可見纖維母細(xì)胞分布

11、，iNOS在兩種疾病的纖維母細(xì)胞上均有表達(dá)，無顯著性差異(p>0.05)，兩者表達(dá)的陽性率無本質(zhì)差別。 結(jié)論: ①eNOS缺乏能導(dǎo)致成骨細(xì)胞的數(shù)量減少，成骨功能降低及破骨細(xì)胞的功能受抑制，其表達(dá)缺失與FD與OF的臨床病理特征間有著密切的關(guān)系。 ②iNOS的活性被激活后可導(dǎo)致成骨細(xì)胞生長和功能被顯著抑制，其過表達(dá)及表達(dá)差異的顯著性與兩種疾病的臨床病理特征間有著密切的關(guān)系。 ③三種NOS在人體骨細(xì)胞內(nèi)的