探討維藥潰結(jié)安對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎中c-jun的作用及RNA干擾技術(shù).pdf

1、目的：探討c-jun基因在大鼠潰瘍性結(jié)腸炎(UC)中的表達(dá)變化及應(yīng)用RNA干擾(RNAi)技術(shù)初步尋找維藥西帕依潰結(jié)安治療UC的可能作用靶點。方法：1．采用DNCB(2,4-二硝基氯苯)復(fù)合乙酸灌腸的方法復(fù)制大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型，將動物隨機分為正常組、潰瘍性結(jié)腸炎模型組、維藥西帕依潰結(jié)安干預(yù)組、5-氨基水楊酸(5-ASA)陽性對照組和生理鹽水陰性對照組，采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和Western blot方法檢測各組

2、大鼠結(jié)腸組織中c-jun的表達(dá)變化；2．構(gòu)建pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO/c-jun及pSilencer-c-Jun干擾載體，將二者共轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞，倒置熒光顯微鏡下觀察結(jié)果，同時用Western blot方法檢測GFP蛋白表達(dá)。結(jié)果：1．在mRNA水平：各組間c-jun的表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.071)。在蛋白質(zhì)水平：模型組中c-Jun的表達(dá)高于正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，潰結(jié)安干預(yù)組中c-Jun的表達(dá)

3、低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，潰結(jié)安干預(yù)組與生理鹽水組之間c-Jun的表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；2．成功構(gòu)建了pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO/c-jun及pSilencer-c-Jun干擾載體，在倒置熒光顯微鏡下可見綠色熒光蛋白，且找到了有效的siRNA，經(jīng)Western blot方法檢測GFP蛋白的表達(dá)明顯降低。結(jié)論：1．c-jun基因可能參與了潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生發(fā)展，且c-jun基因可能是維藥西帕依