microRNA與肺血增多型肺動(dòng)脈高壓的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:(1)探討二氯乙酸鈉(Dichloroacetate,DCA)對(duì)肺血流量增多所致大鼠肺動(dòng)脈高壓(pulmonary arterial hypertension,PAH)的影響；(2)近年來(lái)發(fā)現(xiàn)多種microRNA(miRNA)在心血管系統(tǒng)中發(fā)揮了極其重要的作用,應(yīng)用miRNA芯片技術(shù)研究miRNA在先天性心臟病相關(guān)肺動(dòng)脈高壓相關(guān)性;(3)循環(huán)miRNA可作為心血管疾病的標(biāo)志物,miRNA具有調(diào)控細(xì)胞分化、增殖、凋亡的功能,肺動(dòng)脈高

2、壓是血管增殖性疾病,miRNA與肺動(dòng)脈高壓密切相關(guān),探討循環(huán)miRNA作為先天性心臟病相關(guān)肺動(dòng)脈高壓無(wú)創(chuàng)診斷標(biāo)志物的可能性。
　　 方法:(1)將雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組:對(duì)照組,病例組,預(yù)防組和逆轉(zhuǎn)組。后三組通過(guò)手術(shù)建立腹主動(dòng)脈與下腔靜脈分流,增加肺血流量誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓產(chǎn)生。預(yù)防組和逆轉(zhuǎn)組分別于術(shù)后當(dāng)天和術(shù)后12周開始給予二氯乙酸鈉灌胃(75mg/kg)。第16周測(cè)量肺動(dòng)脈壓力和頸動(dòng)脈壓力,處死動(dòng)物,取肺組織進(jìn)行常規(guī)病理學(xué)檢測(cè)

3、。(2)收集室間隔缺損(yentricular septal defect,VSD)合并重度PAH(PAH組)和輕度PAH患者肺組織(對(duì)照組)(n=6/組)。分別提取總RNA,然后采用miRNA芯片進(jìn)行miRNA表達(dá)譜差異分析,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證。(3)收集室間隔缺損合并重度肺動(dòng)脈高壓患者血漿14例(病例組),室間隔缺損不伴肺動(dòng)脈高壓患者血漿14例(對(duì)照組)。分別從血漿中提取總RNA并進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè),進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),獲得相應(yīng)m

4、iRNA的cDNA,以U6 snRNA為內(nèi)參進(jìn)行標(biāo)定,進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和各樣本的定量PCR結(jié)果計(jì)算miR-19a的表達(dá)量并繪制ROC曲線。
　　 結(jié)果:和對(duì)照組相比,病例組肺動(dòng)脈壓力顯著升高,肺動(dòng)脈中膜厚度顯著增加,而且預(yù)防組和逆轉(zhuǎn)組肺動(dòng)脈壓力明顯低于病例組,肺動(dòng)脈中膜厚度無(wú)明顯增厚,與對(duì)照組無(wú)明顯差異,且各組體循環(huán)壓力無(wú)明顯差異；先天性心臟病相關(guān)肺動(dòng)脈高壓肺組織miRNA表達(dá)譜中共有78個(gè)

5、差異表達(dá)位點(diǎn),其中有62個(gè)上調(diào),16個(gè)下調(diào)。實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證miR-130a和miR-27b的表達(dá)量,結(jié)果miR-130a和miR-27b分別平均上調(diào)2.378倍和1.636倍；重度PAH患者血漿中miR—19a拷貝數(shù)明顯高于對(duì)照組。ROC曲線下面積為0.865(95％可信區(qū)間,CI=0.727-1.002,P<0.001),循環(huán)miR-19a診斷先天性心臟病相關(guān)肺動(dòng)脈高壓具有較高的敏感性和特異性。
　　 結(jié)論:DCA可有效抑