黃芩甙預(yù)處理對(duì)幼年大鼠驚厥性腦損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：了解幼年大鼠驚厥持續(xù)狀態(tài)(Status convulsion，SC)后是否存在遲發(fā)性神經(jīng)元死亡(delayed neuronal death，DND)；觀察幼年大鼠SC后海馬Caspase-3和白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)表達(dá)的變化與神經(jīng)元凋亡情況，并探討神經(jīng)元凋亡與Caspase-3的相關(guān)性；探討黃芩甙(Baicalin，BC)對(duì)幼年大鼠驚厥性腦損傷的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制。 方法：生后21d SD雄性大鼠，隨機(jī)分成A

2、組(正常對(duì)照組)、B組(SC組)、C組(黃芩甙預(yù)處理組)、D組(NS預(yù)處理組)4組，每組各26只。B、C、D各組隨機(jī)分為兩亞組(即B1、B2，C1、C2，D1、D2組)，分別于驚厥后24h、72h處死；A組也隨機(jī)分為A1、A2組，于對(duì)應(yīng)時(shí)點(diǎn)處死。采用氯化鋰-匹羅卡品法制作SC模型，觀察大鼠行為學(xué)變化，記錄各組大鼠的驚厥率、驚厥潛伏期、驚厥程度分級(jí)、驚止時(shí)間、死亡情況，并選擇合格致病模型。C組在造模前三天每天予黃芩甙(16mg/kg)腹腔

3、注射；D組在造模前三天每天予腹腔注射等劑量的NS，方法同C組。4組按各時(shí)間點(diǎn)處死后，利用光鏡和電鏡觀察大腦海馬區(qū)組織病理學(xué)改變；采用TUNEL技術(shù)檢測(cè)海馬組織凋亡細(xì)胞表達(dá)情況，用免疫組化法檢測(cè)海馬組織Caspase-3、IL-1β免疫陽性細(xì)胞的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1.各組大鼠SC后的行為變化：78只試驗(yàn)大鼠腹腔注射匹魯卡品后73只(73/78)成功誘發(fā)SC。D組與B組比較，造模成功率、V級(jí)驚厥率和潛伏期均無差異(P＞0.

4、05)。C組分別與B組、D組比較，上述三項(xiàng)指標(biāo)均有顯著性差異(P＜0.05)。SC后總死亡率為12.8％(10/78)，5只(5/78)于SC后24h內(nèi)死亡；5只(5/78)死于SC后24h～72h。 2.HE染色結(jié)果：A組正常海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)錐體細(xì)胞層次清晰，排列整齊緊密，神經(jīng)元輪廓清晰，核大而圓。B1組和D1組CA1區(qū)、CA3區(qū)錐體細(xì)胞有不同程度的神經(jīng)元變性及丟失。B2組和D2組海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)組織切片部分胞核均

5、勻固縮，細(xì)胞呈三角形或不規(guī)則形，有紅色神經(jīng)元和“空穴”區(qū)出現(xiàn)。C1組和C2組大鼠也可見神經(jīng)元變性，但程度分別較B1組和B2組輕。 3.電鏡觀察結(jié)果：正常A組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)清晰，胞膜及核膜完整光滑，核染色質(zhì)分布均勻，胞漿內(nèi)線粒體、高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器豐富。B1組神經(jīng)元部分線粒體空泡化，核膜局部模糊。B2組部分神經(jīng)元核膜模糊、部分溶解，核固縮，部分線粒體腫脹，染色質(zhì)邊集，細(xì)胞質(zhì)致密度增加。C1組部分神經(jīng)原核膜節(jié)段性模糊，

6、部分線粒體輕度水腫。C2組細(xì)胞核輕度固縮，染色質(zhì)邊集。D1組、D2組神經(jīng)元改變同B1組、B2組。 4.TUNEL染色陽性細(xì)胞表達(dá)結(jié)果：A組數(shù)個(gè)TUNEL凋亡陽性細(xì)胞表達(dá)；B1和D1組海馬CA1區(qū)有多量、B2和D2組大量凋亡陽性細(xì)胞，72h與24h組比較均具有顯著性差異(P＜0.05)。B1、C1、D1組分別與A1組比；B2、C2、D2組分別與A2組比均有顯著性差異(P＜0.01)。B組與D組同一時(shí)點(diǎn)比較無差異(P＞0.05)。B

7、C預(yù)處理C1、C2組凋亡陽性細(xì)胞較B1、B2和D1、D2存在明顯的減少(P均＜0.05)。 5.免疫組化檢測(cè)Caspase-3陽性細(xì)胞表達(dá)結(jié)果：A組Caspase-3陽性細(xì)胞表達(dá)的IOD值低；SC后B、D組兩時(shí)點(diǎn)Caspase-3陽性細(xì)胞表達(dá)的IOD值增高，均明顯高于正常A組(P＜0.01)；B、D組SC后72h海馬CA1、CA3區(qū)Caspase-3 IOD值比24h均顯著性增高(P＜0.01)；B與D組同一時(shí)點(diǎn)無差異(P＞0.

8、05)。BC預(yù)處理C組兩時(shí)點(diǎn)CA1、CA3區(qū)IOD值均較B、D組顯著性下降(P＜0.05或P＜0.01)。 6.免疫組化檢測(cè)IL-1β陽性細(xì)胞表達(dá)結(jié)果：SC后海馬CA1、CA3區(qū)兩時(shí)點(diǎn)IL-1β陽性細(xì)胞表達(dá)的IOD值均明顯高于正常組(P＜0.01)；72h對(duì)比24h，各SC組CA1、CA3區(qū)IL-1β IOD值均顯著下降(P＜0.01)。B組CA1、CA3區(qū)兩時(shí)點(diǎn)的IOD值與D組無差異(P＞0.05)。BC預(yù)處理SC后24h C

9、A1、CA3區(qū)IL-1βIOD值分別較B1、D1組明顯降低(P＜0.01或P＜0.05)。 7.SC大鼠海馬CA1 Caspase-3水平和TUNEL含量相關(guān)性分析：SC大鼠海馬CA1 Caspase-3 IOD值和TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)之間正相關(guān)(r=0.657，P＜0.01，n=30)。 結(jié)論： 1.幼年大鼠SC后海馬細(xì)胞存在DND，細(xì)胞凋亡是損傷的主要形式。 2.Caspase-3參與了驚厥性腦損傷的