凌霄花總黃酮對大、小鼠短暫腦缺血模型的干預作用研究.pdf

1、　　目的：探討凌霄花總黃酮對小鼠短暫腦缺血再灌注模型、小鼠短暫腦缺血發(fā)作(TIA)模型、大鼠TIA模型的影響。通過觀察凌霄花總黃酮抗氧化、抗炎癥損傷作用和對能量代謝、血液流變學、神經生長因子以及腦組織病理改變的影響,揭示凌霄花總黃酮對短暫腦缺血模型的作用特點。
　　方法：采用阻斷雙側頸總動脈(CCA)10min,再灌注15min,復制小鼠短暫性腦缺血再灌注模型：各組分別灌服大、中、小劑量凌霄花總黃酮混懸液,尼莫地平混懸液,養(yǎng)血

2、清腦顆?；鞈乙?假手術組、模型組灌服同體積0.1%羧甲基纖維素鈉(CMC)混懸液,每天給藥1次,連續(xù)給藥10d。于第10d給藥后1h,造小鼠短暫性腦缺血再灌注模型,假手術組只分離CCA,不阻斷血流。再灌注15min后快速斷頭,取腦,分別測腦勻漿中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、細胞粘附因子-1(ICAM-1/CD54)含量、HE染色觀察腦組織海馬區(qū)和皮質區(qū)的病理形態(tài)變化。
　　采用尾靜脈注射過氧化叔

3、丁醇(t-BHP)復制小鼠 TIA 模型。各組分別灌服大、中、小劑量凌霄花總黃酮混懸液,尼莫地平混懸液,養(yǎng)血清腦顆?；鞈乙?空白組、模型組灌服同體積 0.1%CMC 混懸液,每天 1 次,連續(xù)給藥10d。在給藥第3、6、9d分別尾靜脈注射t-BHP, 10min后,置于0.45L密封的廣口瓶中,缺氧15min后取出,進行神經行為學評分。于末次造模的第2d灌胃1h后,迅速斷頭,取腦。分別測定腦勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA

4、)、一氧化氮(NO)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)含量、HE染色觀察腦組織海馬區(qū)和皮質區(qū)的病理形態(tài)變化。
　　采用尾靜脈注射t-BHP復制大鼠TIA模型。各組分別灌服大、中、小劑量凌霄花總黃酮混懸液、尼莫地平混懸液、養(yǎng)血清腦顆?；鞈乙?模型組和空白組灌服同體積 0.1%CMC。每天 1次,連續(xù)給藥 7d。在給藥第 3、6d分別尾靜脈注射 t-BHP, 10min后,置于 1L密封的廣口瓶中,缺氧 1

5、0min后取出,進行神經行為學評分。于第2次誘發(fā)TIA后第2d給藥1h后,立即眼眶取血,測凝血時間、血沉、紅細胞壓積、全血黏度等血液流變學指標。迅速取腦,測腦勻漿中乳酸(LD)含量,乳酸脫氫酶(LDH)、三磷酸腺苷(ATP)酶活力并 HE 染色觀察腦組織海馬區(qū)和皮質區(qū)的病理形態(tài)變化,免疫組化觀察腦組織成纖維細胞生長因子( FGF)、胰島素生長因子( IGF)的變化。
　　結果：小鼠短暫腦缺血再灌注模型復制成功,與假手術組相比,

6、模型組小鼠腦勻漿中 TNF-α、IL-1β、ICAM-1/CD54 含量顯著升高,腦組織海馬區(qū)和皮質區(qū)出現明顯水腫、細胞核固縮等現象,病變神經細胞計數顯著增高。凌霄花總黃酮組能顯著降低模型小鼠腦勻漿中 TNF-α、IL-1β、ICAM-1/CD54含量,顯著減輕腦組織海馬區(qū)和皮質區(qū)的神經細胞計數,顯著減輕病理損傷程度。
　　小鼠TIA模型復制成功：與空白組相比,模型組小鼠神經癥狀評分顯著升高,腦勻漿中MDA含量、NO水平顯著升

7、高,SOD、 GSH-Px、CAT活力顯著降低,腦組織海馬區(qū)和皮質區(qū)神經細胞萎縮、核內染色質固縮等現象,病變神經細胞計數顯著增高。凌霄花總黃酮組能顯著降低模型小鼠行為學評分,顯著降低MDA、NO水平,顯著升高小鼠腦勻漿中GSH-Px、CAT、SOD活力,顯著減輕腦組織海馬區(qū)和皮質區(qū)的神經細胞計數,顯著減輕病理損傷程度。
　　大鼠TIA模型復制成功：與空白組相比,模型大鼠行為學評分、發(fā)作次數、發(fā)作累計時間顯著增高、發(fā)作潛伏時間顯

8、著縮短；凝血時間顯著縮短、紅細胞變形指數顯著降低,血沉、紅細胞壓積、血漿粘度、全血黏度、紅細胞剛性指數、血沉方程K值顯著升高；腦勻漿LD含量顯著升高,LDH、ATP酶活力顯著降低。腦組織海馬區(qū)神經細胞出現明顯萎縮或消,皮質區(qū)神經細胞出現水腫現象,病變神經細胞計數顯著增高。皮質區(qū)FGF、IGF陽性表達有升高趨勢。凌霄花總黃酮組能顯著降低模型大鼠行為學評分、發(fā)作次數、發(fā)作累計時間,顯著延長發(fā)作潛伏時間,顯著改善全血流變各項指標,顯著降低腦勻