代謝綜合征大鼠心血管重構(gòu)的基礎(chǔ)及藥物干預(yù)研究.pdf

1、代謝綜合征（metabolic syndrome，MS）是向心性肥胖、高血糖、高血壓和血脂紊亂等多種因素在個體聚集的癥候群。隨著MS發(fā)病率的急劇升高，由MS導(dǎo)致的心血管并發(fā)癥也明顯增多。MS各組成成分都是心血管病的危險因素，這些與代謝有關(guān)的多種疾病或致病因素同時出現(xiàn)在一個個體身上，其臨床預(yù)后不良的危險大于僅有一種危險因素患者，而且其效應(yīng)不是簡單相加，而是協(xié)同加劇，嚴(yán)重危害人類健康。 左室肥厚是心血管事件的一項重要的獨立危險因素。

2、隨著代謝性危險因素的增加，如高血壓合并糖尿病、肥胖或血脂紊亂等，則左室肥厚更加明顯。既往對單純高血壓和糖尿病引起的心臟損害研究較多，而少有關(guān)于MS心肌重構(gòu)及其分子機(jī)制的報道。本研究在建立MS大鼠模型的基礎(chǔ)上，明確MS多種代謝異常因素共同作用對心肌重構(gòu)的影響，闡明其機(jī)制，并尋找能延緩或逆轉(zhuǎn)MS心肌重構(gòu)的藥物。 MS的主要病理生理基礎(chǔ)是胰島素抵抗。隨著MS發(fā)病機(jī)制研究的進(jìn)一步深入，炎癥在胰島素抵抗及MS中的作用越來越受到重視。炎性

3、因子激活的一系列激酶可以使胰島素作用底物（insulin receptor substrate，IRS）絲氨酸/蘇氨酸磷酸化，阻礙其正常的酪氨酸磷酸化。目前研究較多的炎癥導(dǎo)致胰島素抵抗的三條途徑為IKK/NF-κB、JNK及SOCS-3途徑。既往研究顯示，胰島素和胰島素受體結(jié)合后主要通過兩條途徑將信號下傳至效應(yīng)器：其中之一是經(jīng)IRS/PI3K/Akt通路。當(dāng)胰島素與受體的α亞基結(jié)合并改變了β亞基的構(gòu)型后，酪氨酸蛋白激酶被激活，將IRS上

4、具有重要作用的十幾個酪氨酸殘基磷酸化，磷酸化的IRS結(jié)合并激活下游效應(yīng)物，即PI3K/Akt通路，最后參與細(xì)胞代謝、生存/凋亡、分化和增殖等過程。但目前，關(guān)于MS患者炎癥影響心肌胰島素信號傳導(dǎo)的研究較為少見。 黃連解毒湯（HLJDT）是清熱解毒經(jīng)典方劑，源于唐代王烹《外臺秘要》，由黃連、黃岑、黃柏、桅子四味生藥組成。研究表明，黃連解毒湯具有降糖、調(diào)脂、抗炎、改善胰島素抵抗等作用，但黃連解毒湯對代謝綜合征心肌重構(gòu)的作用及機(jī)制研究較

5、少。本研究旨在建立飲食誘導(dǎo)的MS大鼠模型，該模型具有人MS的許多相似特征。以此MS大鼠模型為研究對象，明確MS大鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能改變，探討炎癥導(dǎo)致MS心肌重構(gòu)的可能機(jī)制，并研究黃連解毒湯對MS大鼠心肌重構(gòu)的影響及其機(jī)制，從而為藥物干預(yù)MS心肌重構(gòu)，延緩心肌重構(gòu)向心力衰竭的轉(zhuǎn)化提供新思路。 目的: 1.建立飲食誘導(dǎo)的MS大鼠模型。 2.觀察MS大鼠模型心臟結(jié)構(gòu)和功能的變化特點。 3.評價黃連解毒湯對MS大鼠

6、心肌重構(gòu)的治療效果。 4.探討炎癥抑制胰島素信號傳導(dǎo)而導(dǎo)致MS心肌重構(gòu)的機(jī)制。 5.探討黃連解毒湯對MS大鼠心肌重構(gòu)干預(yù)作用的可能機(jī)制，為臨床干預(yù)MS導(dǎo)致的心肌重構(gòu)提供新的治療靶點。 方法: 雄性Wistar大鼠45只，隨機(jī)分為兩組：正常對照組（NC組，n=10），模型組（n＝35）。NC組給予標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料及普通飲水喂養(yǎng)，模型組給予高糖、高脂及高鹽飼料及20％高蔗糖水喂養(yǎng)（HF飲食）。HF飲食喂養(yǎng)16周后

7、，將成模的21只大鼠隨機(jī)分為代謝綜合征組（MS組，n=10）及黃連解毒湯組（HLJDT組，n=11）。此后12周，MS組繼續(xù)給予HF飲食同時每天以生理鹽水2ml灌胃；HLJDT組繼續(xù)給予HF飲食同時每天以黃連解毒湯1.04g/100g灌胃；NC組繼續(xù)給予標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料及普通飲水喂養(yǎng)同時每天以生理鹽水2ml灌胃。 實驗過程中，進(jìn)行以下檢測：（1）整個實驗過程中，每2周稱量體重及測尾動脈血壓1次：（2）分別于造模前、HF飲食喂養(yǎng)16周

8、、實驗?zāi)┏槿§o脈血測定空腹血糖、空腹胰島素、血脂（甘油三酯，膽固醇，高、低密度脂蛋白），并計算胰島素抵抗指數(shù)（IRI）；（3）實驗?zāi)┏槿§o脈血測定血清IL-6及TNF-α水平；（4）分別于實驗開始前、HF飲食喂養(yǎng)16周、實驗?zāi)┻M(jìn)行超聲心動圖檢查。 實驗結(jié)束時處死動物，留取心臟標(biāo)本，進(jìn)行下列檢測：（1）心肌組織超微結(jié)構(gòu)和病理學(xué)檢查；（2）應(yīng)用Masson染色進(jìn)行心肌組織間質(zhì)膠原定量；（3）TUNEL法檢測心肌細(xì)胞凋亡；（4）免疫組

9、織化學(xué)檢測MCP-1、ICAM-1及NF-κB P65、P50；（5）實時定量RT-PCR法檢測CollagenⅠ/Ⅲ、TGF-β、ICAM-1、IL-6、TNF-α、IKKβ及NF-κB等mRNA的表達(dá)；（6）Western Blot法檢測IκB、NF-κB、JNK、IRS-1及Akt等蛋白表達(dá)。 結(jié)論： 1.通過高糖、高鹽及高脂飲食喂養(yǎng)Wistar大鼠16周，成功建立了與人MS相似的大鼠模型，為MS發(fā)病機(jī)制研究提供了