朵麗蝶蘭MIR172的克隆與功能分析.pdf

1、Z h e j i a n g A & F U n i v e r s i t yD i s s e r t a t i o nf o r t h eD e g r e e o f M a s t e rC l o n i n g a n d f u n c t i o n a la n a l y s i s o f M I R l 7 2g e n e i nD o r i t a e n o p s i s h y b r

2、 i dC a n d i d a t e ：L I H a i - r o n gA d v i s e r ：Z H A N G c h i ，A s s o c i a t ep r o f e s s o rS p e c i a l t y ：H o r t i c u l t u r eD a t e o f S u b m i s s i o n ：D e c e m b e r , 2 0 1 5Z h e j i a

3、n g A & F U n i v e r s i t yL i n ’a n ，z h e j i a n gp r o v i n c e ，P ．R ．C h i n aD e c e m b e r , 2 0 1 5摘要摘要朵麗蝶蘭( D o r i t a e n o p s i sh y b r i d ) 是朵麗蘭( D o r i t i s ) 與蝴蝶蘭( P h a l a e n o p s i s )

4、的雜交后代，具有重要的經(jīng)濟價值，同樣存在親本的低溫成花誘導(dǎo)特性，而由此產(chǎn)生的高成本成為弗0 約其持續(xù)發(fā)展的瓶頸。m i c r o R N A s 在植物成花誘導(dǎo)方面發(fā)揮重要作用。m i c r o R N A l 7 2 ( m i R l 7 2 ) 通過負(fù)調(diào)控其靶基因，參與植物成花調(diào)控。本試驗旨在探究D h m i R l 7 2 在朵麗蝶蘭成花誘導(dǎo)中的調(diào)控機理。本研究通過同源克隆的方法從朵麗蝶蘭中獲得兩個M I R l 7 2

5、s 家族基因和m i R l 7 2 的三個候選靶基因片段，通過R e a l - t i m eP C R 分析m i R l 7 2 及其上下游基因的時空表達(dá)情況，同時構(gòu)建了D h M I R l 7 2 的正反義表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化模式植物擬南芥和煙草。主要研究結(jié)果如下：1 、以朵麗蝶蘭基因組D N A 為模板，利用P C R 技術(shù)克隆得到兩個D h M I R l 7 2 s ，并分別命名為D h M I R l 7 2 ．J 和D

6、h M I R l 7 2 —2 ，其長度分別為1 0 0 b p和2 1 l b p ，序列對比結(jié)果顯示，D h p M I R l 7 2 一J 和D h M I R l 7 2 —2 含有相同的成熟體；系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果顯示，D h p M I R l 7 2 ．』、D h M I R l 7 2 —2 與a t h - M I R l 7 2 b 、z m f t —M I R l 7 2 e 、s b i —M I R l 7

7、2 b 、s b i ．M I R l 7 2 f 親緣關(guān)系比較近。2 、以朵麗蝶蘭c D N A 為模板，采用同源克隆技術(shù)分離得到三個朵麗蝶蘭D h m i R l 7 2 的候選靶基因( D h A P 2 、D h T O E l 、D h T O E 2 ) 片段，序列分析表明，獲得的三個候選靶基因片段均含有A P 2 保守結(jié)構(gòu)域，其中一個片段包含D h m i R l 7 2 的結(jié)合域。3 、采用實時熒光定量P C R 分析高

8、低溫處理過程中朵麗蝶蘭的D h m i R l 7 2及其相關(guān)基因的時空表達(dá)情況，結(jié)果顯示：D h m i R l 7 2 在成花過程中受低溫條件特異誘導(dǎo)，并且其表達(dá)具有組織差異性；低溫成花過程中，D h m i R l 7 2 與其3個候選靶基因( D h A P 2 、D h T O E l 、D h T O E 2 ) 間存在顯著的負(fù)調(diào)控關(guān)系；在花梗抽出前期，D h m i R l 7 2 在葉中的表達(dá)量迅速升高，花梗抽出后又有所