血管緊張素Ⅱ—NADPH氧化酶—活性氧通路對高血壓病人的腸系膜動脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響及阿托伐他汀對它的干預(yù)作用.pdf

1、目的：觀察血管緊張素Ⅱ—NADPH氧化酶—活性氧通路對非高血壓和高血壓病人的腸系膜動脈平滑肌細(xì)胞增殖的不同影響；同時觀察阿托伐他汀鈣對該通路的影響及其促平滑肌細(xì)胞增殖作用的干預(yù)作用。 方法： 1．細(xì)胞培養(yǎng)與鑒定：用組織貼塊法培養(yǎng)人腸系膜動脈平滑肌細(xì)胞，在倒置光學(xué)顯微鏡下和免疫細(xì)胞化學(xué)的方法鑒定細(xì)胞。 2．檢測方法：用四甲基偶氮唑鹽（MTT）法比色測定各組平滑肌細(xì)胞增殖率；以雙氫乙酰乙酸—二氯熒光黃（DCFH—DA

2、）作為熒光探針對細(xì)胞內(nèi)活性氧進(jìn)行熒光標(biāo)記，用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧；用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT—PCR）方法檢測細(xì)胞內(nèi)p22phox蛋白mRNA的表達(dá)變化。 3．實驗分組：先分為非高血壓和高血壓兩大組，然后根據(jù)加入不同藥物每個大組分為空白對照組、濃度為10—6mol/L血管緊張素Ⅱ孵育組、濃度均為10—6mol/L血管緊張素Ⅱ和阿托伐他汀鈣共孵育組。 4．?dāng)?shù)據(jù)處理：用SPSS13．0軟件包；所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差

3、表示，配伍隨機(jī)分組方差分析、兩獨立樣本均數(shù)T檢驗和直線相關(guān)分析進(jìn)行統(tǒng)計處理，兩兩比較采用LSD法，以P<0．05判定差異的顯著性。 結(jié)果： 1．培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)光學(xué)顯微鏡和免疫細(xì)胞化學(xué)的方法鑒定為平滑肌細(xì)胞，純度在90%以上。 2．血管緊張素Ⅱ在濃度為10—6mol/時促進(jìn)人腸系膜動脈平滑肌細(xì)胞增殖。與空白對照組比較，加入血管緊張素Ⅱ藥物組的OD值均明顯高于空白對照組且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．01）。 3．

4、血管緊張素Ⅱ在濃度為10—6mol/時促進(jìn)人腸系膜動脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)活性氧的生成。流式細(xì)胞儀測定顯示，與空白對照組比較，加入血管緊張素Ⅱ藥物組的熒光強(qiáng)度比值均明顯高于空白對照組且有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．01）。 4．血管緊張素Ⅱ在濃度為10—6mol/時促進(jìn)腸系膜動脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)p22phox蛋白mRNA的表達(dá)。 5．與非高血壓病人相比，血管緊張素Ⅱ—NADPH氧化酶—活性氧通路對高血壓病人的腸系膜動脈平滑肌細(xì)胞的促增殖作用

5、更強(qiáng)，無論是細(xì)胞增殖率還是細(xì)胞內(nèi)p22phox蛋白mRNA的表達(dá)均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．01）。 6．阿托伐他汀鈣能夠部分抑制血管緊張素Ⅱ—NADPH氧化酶—活性氧通路的信號傳導(dǎo)及其促增殖作用。與濃度為10—6mol/L血管緊張素Ⅱ孵育組比較，血管緊張素Ⅱ和阿托伐他汀鈣共孵育組的細(xì)胞增殖率、細(xì)胞內(nèi)活性氧、細(xì)胞內(nèi)p22phox蛋白mRNA的表達(dá)均降低并有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．01）。 結(jié)論： 1．血管緊張素Ⅱ的促人腸