甘肅棘豆生物堿部位抗腫瘤活性及其對小鼠免疫調節(jié)活性的實驗研究.pdf

1、目的：(1)體外實驗研究甘肅棘豆生物堿部位對人肝癌HepG2細胞的抑制作用；觀察生物堿部位對HepG2細胞的細胞周期阻滯及誘導凋亡作用；檢測生物堿部位對HepG2細胞的形態(tài)、體外遷移、侵襲和粘附能力的影響。 (2)體內實驗觀察甘肅棘豆生物堿部位對KM小鼠肝癌H22細胞移植腫瘤的抑制作用及對KM小鼠免疫功能的影響；觀察甘肅棘豆生物堿部位極高劑量口服毒性。 方法：(1)體外實驗用MTT法檢測甘肅棘豆生物堿部位對人肝癌HepG

2、2細胞的抑制率及HepG2細胞與Ⅳ型膠原粘附能力的影響；流式細胞術檢測生物堿部位對HepG2細胞誘導凋亡及細胞周期阻滯作用；用倒置相差顯微鏡觀察生物堿部位對HepG2細胞生長及其形態(tài)的影響；Boyden小室檢測生物堿部位對HepG2細胞遷移、侵襲能力的影響。 (2)體內實驗采用鼠源性肝癌細胞H22移植瘤法，將60只KM小鼠隨機分為五組，其中三組分別給予甘肅棘豆生物堿部位32、16、8 mg/㎏體重，兩個對照組分別給予生理鹽水(N

3、S)20ml/㎏體重和5-FU15mg/㎏體重。檢測平均瘤重和抑瘤率，計算脾指數(shù)(SI)、胸腺指數(shù)(TI)，MTT法測脾細胞增殖率。極高劑量口服毒性實驗將生物堿部位按最大容積給予3000mg/㎏體重，觀察小鼠毒性反應。 結果：(1)甘肅棘豆生物堿部位能抑制人肝癌HepG2細胞的生長，且呈時間、劑量依賴性，與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 (2)流式細胞檢測顯示甘肅棘豆生物堿部位能誘導HepG2細胞的周期阻滯，呈

4、劑量依賴性；小劑量能誘導HepG2細胞凋亡。 (3)Boyden小室體外遷移、侵襲能力檢測結果顯示甘肅棘豆生物堿部位對HepG2細胞的遷移、侵襲能力有抑制作用，與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。 (4)粘附實驗結果顯示甘肅棘豆生物堿部位對HepG2細胞與Ⅳ型膠原的粘附能力有抑制作用，與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 (5)體內實驗甘肅棘豆生物堿部位在濃度為32、16、8 mg/㎏體重時，對肝癌細

5、胞H22實體移植瘤的抑制率分別為：43％，29％，23％，且其平均瘤重與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。 (6)甘肅棘豆生物堿部位各劑量組小鼠的脾指數(shù)和胸腺指數(shù)均顯著高于對照組，有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。 (7)甘肅棘豆生物堿部位各組在24h，48h，72h的脾細胞增殖率明顯高于對照組，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 (8)極高劑量口服毒性實驗結果表明，與對照組相比，甘肅棘豆生物堿部位對KM小鼠體重和

6、各主要臟器質量均無明顯影響，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 結論：(1)甘肅棘豆生物堿部位能在體外顯著抑制人肝癌HepG2細胞的生長，且呈時間、劑量依賴性。 (2)甘肅棘豆生物堿部位能誘導人肝癌HepG2細胞的細胞周期阻滯，呈劑量依賴性；且在小劑量時能誘導HepG2細胞凋亡，提示了其可能的抗腫瘤機制。 (3)甘肅棘豆生物堿部位能抑制HepG2細胞的體外遷移、侵襲及與Ⅳ型膠原的粘附能力，提示生物堿部位通過改變Hep