溶血磷脂酸對(duì)人卵巢癌細(xì)胞P120catenin表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　 1.研究溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)誘導(dǎo)人漿液性卵巢癌細(xì)胞株-SKOV3細(xì)胞表達(dá)P120catenin(P120ctn)的變化。
　　 2.研究酪氨酸蛋白激酶抑制劑Genistein對(duì)LPA誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞表達(dá)P120ctn變化的逆轉(zhuǎn)作用。探討LPA和P120ctn在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.取對(duì)數(shù)生長期的SKOV

2、3細(xì)胞,分別加入終濃度為0、0.1、1、10、20、40、801maol/L的LPA及0、10、20、50、100、200gmol/L的Genistein作用6、12、24h后,四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)SKOV3細(xì)胞的增殖率和增殖抑制率。
　　 2.201xmol/L的LPA及200~mol/L的Genistein作用于SKOV3細(xì)胞6、12、24h后,免疫熒光化學(xué)雙重標(biāo)記技術(shù)分別標(biāo)記細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)中的P120ctn,

3、激光共聚焦顯微鏡連續(xù)斷層掃描觀察P120ctn的表達(dá)；RT-PCR和Western blot檢測(cè)P120ctn表達(dá)的變化；流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞周期的變化；Millicell小室人工重組基底膜體外侵襲遷移實(shí)驗(yàn),檢測(cè)細(xì)胞侵襲和遷移能力的改變。
　　 結(jié)果:
　　 1.MTT結(jié)果顯示濃度為20μmol/L的LPA作用24h促進(jìn)SKOV3細(xì)胞增殖作用最強(qiáng)(P<0.05)。200pmol/L的Genistein對(duì)LPA促進(jìn)

4、SKOV3細(xì)胞增殖有明顯抑制作用(P<0.05)。
　　 2.免疫熒光細(xì)胞化學(xué)雙重標(biāo)記激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)和Westernblot檢測(cè)結(jié)果均顯示LPA可誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞膜中P120ctn的表達(dá)減少,胞質(zhì)中的表達(dá)增多；而Genistein與LPA共同作用后,P120ctn在細(xì)胞膜和胞質(zhì)中的表達(dá)則相反。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示SKOV3細(xì)胞總蛋白中P120ctn的量不變。FCM檢測(cè)顯示,與對(duì)照組相比,LPA可使SKOV3細(xì)胞處于G

5、1期的細(xì)胞減少,S期細(xì)胞增多(P<0.05)；而Genistein與LPA共同作用后,S期細(xì)胞減少,G2期細(xì)胞增多(P<0.05)。Millicell小室體外侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示LPA使細(xì)胞侵襲遷移能力明顯增強(qiáng)(P<0.05)；而Genistein與LPA共同作用后,細(xì)胞侵襲遷移能力減弱(P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.LPA能促進(jìn)SKOV3細(xì)胞增殖,而Genistein對(duì)LPA促進(jìn)SKOV3細(xì)胞增殖有明顯抑制

6、作用。
　　 2.LPA可誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞膜中P120ctn的表達(dá)減少,胞質(zhì)中的表達(dá)增多；而Genistein與LPA共同作用后,可逆轉(zhuǎn)由LPA誘導(dǎo)的SKOV3細(xì)胞表達(dá)P120ctn的變化。提示Genistein能抑制LPA誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞表達(dá)P120ctn的作用。
　　 3.LPA可使SKOV3細(xì)胞處于G1期的細(xì)胞減少,S期細(xì)胞增多,提示LPA可促進(jìn)SKOV3細(xì)胞的增殖；而Genistein與LPA共同作用后,S期