白介素13和溶血磷脂酸對(duì)人肝星狀細(xì)胞合成Ⅰ型和Ⅲ型膠原的影響.pdf

1、目的:
　　 白細(xì)胞介素13(Interleukine-13,IL-13)是一種主要由激活的T淋巴細(xì)胞(Th2細(xì)胞)產(chǎn)生的具有多效能的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子。它可以調(diào)節(jié)炎癥、黏液的產(chǎn)生、組織重建和纖維化。IL-13在肝纖維化、腎纖維化、心臟纖維化、肺纖維化等纖維化疾病發(fā)病機(jī)制中起重要的作用,它通過與IL-13受體α1(IL-13Ra1)結(jié)合產(chǎn)生促纖維化作用,因此它是纖維化疾病治療的重要靶點(diǎn)。
　　 溶血磷脂酸(Lysophos

2、phatidic acid,LPA)是一種細(xì)胞膜脂類衍生物,是已知最小、最簡單的甘油磷脂分子。LPA由成纖維細(xì)胞、血小板、脂肪細(xì)胞、癌細(xì)胞等分泌,是一種重要的細(xì)胞絲裂原素,它的作用多樣化。它具有促進(jìn)血管平滑肌收縮、促進(jìn)血小板聚集等作用,也可以抑制細(xì)胞的增殖和膠原的合成。
　　 本實(shí)驗(yàn)主要檢測IL-13是否能促進(jìn)人肝星狀細(xì)胞膠原的合成,溶血磷脂酸(LPA)是否能下調(diào)人肝星狀細(xì)胞膠原的合成,為臨床上肝硬化等纖維化疾病提供治療的理論基

3、礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.臺(tái)盼藍(lán)染色檢測肝人星狀細(xì)胞LX-2的活性。
　　 2.HE染色觀察LX-2細(xì)胞的形態(tài)。
　　 3.檢測LPA刺激LX-2細(xì)胞對(duì)IL-13Rα1表達(dá)的影響。分別以不同濃度、不同時(shí)間刺激LX-2細(xì)胞,并設(shè)空白對(duì)照組,RT-PCR檢測IL-13Rα1mRNA的表達(dá)。
　　 4.檢測IL-13刺激LX-2細(xì)胞對(duì)Ⅰ型膠原(Procollagen typeⅠ,PCOLⅠ

4、)、Ⅲ型膠原(Procollagen typeⅢ,PCOLⅢ)mRNA表達(dá)的影響;檢測LPA刺激LX-2細(xì)胞對(duì)Ⅰ型膠原(PCOLⅠ)、Ⅲ型膠原(PCOLⅢ)mRNA表達(dá)的影響,用不同濃度LPA在不同時(shí)間刺激LX-2細(xì)胞,RT-PCR檢測PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA的表達(dá);然后分四組:空白組、IL-13組、LPA和IL-13混合組、LPA組,RT-PCR檢測PCOLⅠ、PCOLⅢ mRNA的表達(dá)。
　　 5.免疫組化檢測Ⅰ型膠原

5、蛋白的表達(dá)。分四組:空白組、IL-13組、LPA和IL-13混合組以及LPA組。
　　 結(jié)果:
　　 1.LX-2細(xì)胞活性良好,而且IL-13和LPA對(duì)細(xì)胞無毒性作用。
　　 2.HE染色觀察LX-2細(xì)胞為星狀,細(xì)胞核呈圓形或橢圓形。
　　 3.RT-PCR檢測顯示,不同濃度LPA在不同時(shí)間刺激LX-2細(xì)胞,對(duì)LX-2細(xì)胞表達(dá)IL-13Rα1mRNA無影響。
　　 4.RT-PCR檢測顯示,IL-

6、13刺激LX-2細(xì)胞后,PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA表達(dá)上調(diào)。
　　 5.0.1μM濃度的LPA刺激LX-2細(xì)胞6h、12h、24h時(shí),LX-2細(xì)胞PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA表達(dá)與空白對(duì)照組相比無明顯變化。1μM、10μM LPA刺激24h后,LX-2細(xì)胞PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA表達(dá)下降。分組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:IL-13組PCOLⅠ、PCOLⅢmRNA的表達(dá)均高于空白對(duì)照組,而LPA組的表達(dá)均低于空白對(duì)照組。免疫組化檢測