非抗性篩選生長抑素DNA疫苗免疫育肥豬的臨床試驗(yàn)效果和安全性研究.pdf

1、前期研究證明，重組菌C500(pVGS/2SS-asd)基因疫苗免疫可以促進(jìn)小鼠生長，并且對小動(dòng)物無不良影響。為了進(jìn)一步了解該疫苗對大動(dòng)物的免疫效果及其機(jī)制和安全性，本研究選擇78頭80日齡的杜長大育肥豬，隨機(jī)分成6組，用同一劑量(5×1011CFU/頭)三種免疫方式（口腔+鼻腔、口腔、鼻腔）、同一免疫方式（口腔+鼻腔）三種劑量（高5×1011 CFU/頭、中5×1010 CFU/頭、低5×109 CFU/頭）進(jìn)行臨床試驗(yàn)，試驗(yàn)期90

2、d，探討最適免疫方法和免疫劑量。采用美國奧飼本(OSBORNE)公司生產(chǎn)的投料器和種豬生產(chǎn)性能WINFIRE測定系統(tǒng)每天自動(dòng)記錄實(shí)驗(yàn)豬的飼料消耗量、測定豬體重，飼料報(bào)酬以評定基因疫苗免疫效果;從免疫后豬的日常行為及體溫是否正常、應(yīng)用目的基因擴(kuò)增等方法從基因整合、環(huán)境擴(kuò)散等方面評價(jià)疫苗的安全性;應(yīng)用ELISA方法測定抗體和激素水平，以探討其作用機(jī)制。結(jié)果如下:
　　1.促生長效果及飼料報(bào)酬采用美國奧飼本公司生產(chǎn)的種豬生產(chǎn)性能WINF

3、IRE測定系統(tǒng)每天全自動(dòng)記錄豬采食量和體重?cái)?shù)據(jù)，免疫前期育肥豬生長速度較快，后期增重減緩;探究免疫方式對育肥豬的促生長效果，結(jié)果表明，各時(shí)期試驗(yàn)組日增重均高于對照組，免疫后4-7 w，噴鼻組日增重顯著高于對照組（P＜0.05）;探究免疫劑量對育肥豬的促生長效果，結(jié)果表明，與對照組相比，初免疫后7 w，中劑量、低劑量組日增重均提高19.94％，差異極顯著(P＜0.01)，整個(gè)試驗(yàn)階段，各免疫組的平均日增重均高于對照組，而低劑量組的日增重比

4、對照組提高9.41％，差異顯著(P＜0.05)。
　　免疫方式組、免疫劑量組的日采食量相比對照組均有所增加，但無明顯差別;不同免疫方式組間，鼻腔組的料肉比低于對照組（P＞0.05），不同免疫劑量組間，低劑量組的料肉比低于對照組(P＞0.05)。
　　2.安全性研究本研究從免疫后豬的日常行為、基因整合情況、環(huán)境污染三個(gè)方面評估重組菌C500(pVGS/2SS-asd)的安全性，結(jié)果顯示，所有試驗(yàn)豬免疫后采食、飲水、糞便情況、精

5、神狀態(tài)等日常行為和體溫均正常，初步證明該疫苗的安全性;免疫后12w（即出欄時(shí)）采集每頭豬的心、肝、肺、肌肉、脂肪組織并提取DNA，經(jīng)PCR方法檢測，所有組織中均未檢測到目的基因GS/2SS，結(jié)果提示，該質(zhì)粒沒有整合至動(dòng)物的基因組中;在每次免疫后第1、3、5、7、10、15、20、30d采集所有試驗(yàn)豬的糞樣、水樣、豬舍前后5m的土壤樣本，用麥康凱選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，挑選可疑菌落進(jìn)行PCR檢測，所有樣本均未擴(kuò)增出目的基因GS/2SS，表明生長抑

6、素基因疫苗沒有造成環(huán)境污染。
　　3.免疫應(yīng)答反應(yīng)探究免疫方式（口腔+鼻腔、口腔、鼻腔）對育肥豬的免疫效果，研究表明，三種免疫方式均誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，口腔+鼻腔組和口腔組的抗體水平顯著高于對照組（P＜0.05），且口腔+鼻腔組顯著高于口腔組，提示口腔+鼻腔的免疫方式可以誘導(dǎo)更高水平的免疫應(yīng)答;探究免疫劑量（高5×1011 CFU/頭、中5×1010 CFU/頭、低5×109 CFU/頭）對育肥豬免疫效果的結(jié)果顯示，低劑量組體現(xiàn)