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文檔簡介
1、為了提高HPV16E6羧基端片段的免疫原性,該研究旨在構(gòu)建以HBD2為免疫佐劑的宮頸癌HPV16E6羧基(C)端基因片段嵌合核酸疫苗.首先參照Internet基因庫HPV16E6 cDNA序列(基因登錄號(hào):NC001526)利用引物設(shè)計(jì)軟件Primer5.0進(jìn)行引物設(shè)計(jì),從中選擇最佳引物,并在引物5′-端分別添加真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA 3.1多克隆位點(diǎn)中所包含的BamH Ⅰ和Xba Ⅰ酶切位點(diǎn)及保護(hù)堿基,以新鮮宮頸癌組織提取的基因組DN
2、A為模板,擴(kuò)增HPV16E6C基因片段(nt254-559).擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)BamH Ⅰ與Xba Ⅰ雙酶切,定向克隆于pcDNA 3.1載體,構(gòu)建包含HPV16E6C片段的質(zhì)粒pcDNA 3.1/HPV16E6C,并在重組質(zhì)粒pcDNA3.1/HPV16E6C的基礎(chǔ)上以相同的分子克隆方法將HBD2[有兩種形式:pHBD2(含信號(hào)肽的HBD2)與mHBD2(成熟肽HBD2)]片段插入其中,構(gòu)建嵌合HBD2-HPV16E6C的重組質(zhì)粒pcDNA
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