rhBMP-2調(diào)節(jié)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞VEGF表達(dá)的生物學(xué)規(guī)律及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：rhBMP-2是構(gòu)建血管化組織工程骨理想的生長因子，本課題擬研究不同誘導(dǎo)濃度以及不同誘導(dǎo)時間點(diǎn)rhBMP-2調(diào)節(jié)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)VEGF的生物學(xué)規(guī)律并探討 p38信號通路在此過程中的調(diào)節(jié)作用。
　　方法：從成人脂肪組織中分離培養(yǎng)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，培養(yǎng)至三代。采用RT-PCR及ELISA從基因水平和蛋白水平檢測不同誘導(dǎo)濃度（0ng/ml，50ng/ml，100ng/ml）以及不同誘導(dǎo)時間點(diǎn)（3h，6h，12h，18h，2

2、4h，36h，48h）rhBMP-2誘導(dǎo)下人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)VEGF的規(guī)律。采用Western-blot檢測比較不同誘導(dǎo)濃度（0ng/ml，50ng/ml，100ng/ml，200ng/ml）及不同誘導(dǎo)時間點(diǎn)（3h，6h，24h，36h）p38信號通路磷酸化的水平并研究其與VEGF表達(dá)量的的相關(guān)性。實(shí)驗(yàn)中加入不同濃度（5μM,10μM）p38特異性阻斷劑sb203580后采用RT-PCR以及ELISA檢測人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞VEGF表

3、達(dá)的變化。
　　結(jié)果：相同時間點(diǎn)下當(dāng) rhBMP-2誘導(dǎo)濃度為100ng/ml時 VEGF的表達(dá)量最高。3h-6h和18h-24h為誘導(dǎo)組和對照組表達(dá)VEGF的兩個高峰時間段，其中3h-6h時誘導(dǎo)組VEGF的表達(dá)量要低于對照組（P<0.05）而在18h-24h誘導(dǎo)組VEGF的表達(dá)量高于對照組（P<0.05）。p38信號通路磷酸化的水平與VEGF的表達(dá)量密切相關(guān)，兩者表現(xiàn)出相似的變化趨勢。p38阻斷劑sb203580可以抑制VEGF