重組hIFN-α-2b-BCG對人外周血免疫細胞鐘樣蛋白受體表達調節(jié)及其抗腫瘤作用的研究.pdf

1、BCG腔內灌注是防治膀胱腫瘤的重要輔助手段，它在治療淺表膀胱腫瘤、預防其復發(fā)以及防止膀胱腫瘤惡性度增高方面的良好效果已被證實，但其抗腫瘤機理尚不明確，目前多認為與BCG對免疫系統的作用有關；鐘樣蛋白受體是最近幾年發(fā)現的在機體免疫系統中起重要作用的一種跨膜蛋白，相應配體刺激可以激活鐘樣蛋白受體介導的跨膜信號傳導通路，進一步激活核轉錄因子，調節(jié)細胞因子的表達，產生IL-1、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α等細胞因子，活化機體免疫

2、細胞來殺傷腫瘤細胞或直接導致腫瘤細胞凋亡。 目前臨床灌注所用的是野生BCG，臨床證明它在防治膀胱腫瘤方面效果明顯，但是也存在一些問題：有半數病人對其不反應，而且病人副作用比較明顯，嚴重影響治療效果。本實驗室成功研制的重組人IFN-a-2b-BCG是一種新型菌苗，與野生BCG比較，除了保留野生BCG的基本特性外，優(yōu)勢在于可以持續(xù)分泌IFN-α-2b，BCG和IFN-α-2b二者同時作用可以產生最佳的免疫誘導效應，其抗腫瘤作用更明顯

3、，副作用發(fā)生較少，更適合病人長期灌注，是一種有很大社會價值的菌苗。 本課題應用流式細胞儀、免疫熒光、MTT等技術方法比較研究重組hIFN-α-2b-BCG和野生BCG對人體免疫細胞鐘樣蛋白受體表達的調節(jié)以及表達鐘樣蛋白受體免疫細胞抗腫瘤效應，以期能明確hIFN-α-2b-BCG抗腫瘤機制，為臨床應用重組hIFN-α-2b-BCG提供理論支持，同時為膀胱腫瘤的防治提出一條新的思路；將鐘樣蛋白受體增強劑與重組hIFN-α-2b-BC

4、G同時應用于膀胱腫瘤治療。 本研究由三部分組成，第一部分進行重組hIFN-α-2b-BCG和野生BCG對人外周血免疫細胞鐘樣蛋白受體表達調節(jié)的比較。提取健康人外周血淋巴細胞，以相同劑量的重組hIFN-α-2b-BCG和野生BCG作用，淋巴細胞為空白對照，流式細胞儀檢測二者刺激后的淋巴細胞表面鐘樣蛋白受體表達情況。結果表明：二者對淋巴細胞表面鐘樣蛋白受體的表達都有正調節(jié)效應，重組hIFN-α-2b-BCG與野生BCG相比有更強的正

5、調節(jié)作用(P=0.013)。 第二部分探討了重組hIFN-α-2b-BCG和野生BCG對人外周血免疫細胞鐘樣蛋白受體表達調節(jié)差異的可能原因。提取健康人外周血淋巴細胞，以相同劑量的重組hIFN-α-2b-BCG上清、野生BCG上清以及醫(yī)用干擾素作用，淋巴細胞為空白對照，流式細胞儀檢測不同組淋巴細胞表面鐘樣蛋白受體表達情況。結果表明：重組hIFN-α-2b-BCG上清和醫(yī)用干擾素對人外周血淋巴細胞鐘樣蛋白受體表達都有正調節(jié)效應(P=

6、0.001)，而且二者正調節(jié)作用相差無幾(P=0.091)；野生BCG上清對外周血淋巴細胞表面鐘樣蛋白受體的表達幾乎沒有影響(P=0.702)。從這部分研究我們可以推知在第一部分研究中重組hIFN-α-2b-BCG對鐘樣蛋白受體表達有更強正調節(jié)作用的原因可能是由于重組hIFN-α-2b-BCG可以分泌IFN-α-2b至上清中，而IFN-α-2b本身對淋巴細胞鐘樣蛋白受體有正調節(jié)效應，從而使重組hIFN-α-2b-BCG的調節(jié)作用強于野生

7、BCG。 第三部分是表達鐘樣蛋白受體淋巴細胞抗腫瘤效應的研究。我們以處于對數生長期的膀胱腫瘤細胞(5637細胞)作為靶細胞，以重組hIFN-α-2b-BCG、野生BCG、重組hIFN-α-2b-BCG上清、野生BCG上清、醫(yī)用干擾素刺激過的外周血淋巴細胞和未刺激過的淋巴細胞作為效應細胞，設置自然釋放組和Trionx-100最大殺傷組，MTT法比較各組抗腫瘤效應。結果表明：不同組的淋巴細胞對膀胱腫瘤細胞皆有殺傷作用，殺傷效應程度不

8、同，從強到弱依次為：rBCG組、wBCG組、rBCG上清組、醫(yī)用干擾素組、wBCG上清組、空白組；其中rBCG組是wBCG組的1.3倍(P=0.003)，rBCG上清組是wBCG上清組的2.88倍(P=0.000)，rBCG上清組和醫(yī)用干擾素組相差無幾(p=0.897)。淋巴細胞殺傷腫瘤細胞的強弱順序與其鐘樣蛋白受體表達多少順序一致，這說明被激活的淋巴細胞抗腫瘤作用可能與鐘樣蛋白受體有關。本研究進行了重組hIFN-α-2b-BCG的抗腫