外源因子對(duì)雜色鮑血清中一氧化氮水平影響的研究.pdf

1、鮑養(yǎng)殖過程中病害的發(fā)生日趨嚴(yán)重，嚴(yán)重制約了其養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。常規(guī)藥物和方法對(duì)鮑重大流行性疾病難以有效地控制。通過免疫學(xué)技術(shù)激發(fā)機(jī)體自身的免疫防御系統(tǒng)，提高機(jī)體對(duì)各種疾病的抵抗能力，才是解決疾病問題的根本辦法。 一氧化氮(Nitricoxide，NO)作為一種新型生物信使分子、效應(yīng)分子和免疫調(diào)節(jié)分子，廣泛分布于生物體的各個(gè)器官和組織中，參與機(jī)體多種重要的生理病理活動(dòng)，可以通過非特異性地殺傷細(xì)菌、真菌、寄生蟲及病毒等，增強(qiáng)機(jī)體的非特異

2、性免疫，因此成為近幾年生命科學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。但在鮑方面的研究還較為少見。為此，本研究采用生化方法鑒定了雜色鮑(Haliotisdivericolor)血細(xì)胞中一氧化氮合酶(Nitricoxidesynthase，NOS)活性的存在，并研究了正常生理狀態(tài)下與病理生理狀態(tài)下鮑血清中NO/NOS的變化規(guī)律，分析了注射環(huán)磷酰胺和L-精氨酸對(duì)其體內(nèi)NO/NOS的影響，比較了NO/NOS與其他免疫指標(biāo)的關(guān)系，為研究NO/NOS在鮑免疫系統(tǒng)中的作用

3、提供了理論依據(jù)。 1.雜色鮑血細(xì)胞中NOS活性的鑒定采用生物化學(xué)法，以副溶血弧菌和脂多糖為刺激因子，對(duì)雜色鮑血細(xì)胞中的NOS活性進(jìn)行了初步鑒定，并采用硝酸鹽還原酶法測(cè)定了NO的含量。結(jié)果表明：加入LPS或副溶血弧菌組的NO水平顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，分別為對(duì)照組的1.84和1.92倍，而且這一反應(yīng)能被NOS抑制劑L-NAME所阻斷，說明雜色鮑血細(xì)胞中存在NOS活性。 2.注射副溶血弧菌對(duì)雜色鮑血清中NO/NOS的

4、影響對(duì)雜色鮑足部注射濃度為5×105CFU·ml-1、5×106CFU·ml-1和5×107CFU·ml-1的副溶血弧菌懸浮液(劑量為O.1mm/只)，分別在注射前及注射后6h、12h、24h、48h、96h、192h和240h足部取血，測(cè)定其血清中NO含量以及NOS活力的變化情況。結(jié)果表明，注射副溶血弧菌后雜色鮑血清中NO含量及NOS活力顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，且NOS活力的最大值出現(xiàn)的較NO最大值早，NOS的最大值出現(xiàn)在注射

5、后6h，而NO最大值出現(xiàn)在注射后12h。證明注射副溶血弧菌可以誘導(dǎo)雜色鮑NOS的表達(dá)，進(jìn)而合成內(nèi)源性NO，從而增加抵抗疾病的能力。NO含量的上升可以看作是機(jī)體對(duì)外界刺激的一種應(yīng)答。研究結(jié)果為今后研究NO/NOS系統(tǒng)在軟體類免疫中的作用提供一些理論依據(jù)。 3.患潰瘍病和裂殼病鮑血清中NO/NOS及幾種酶活力的變化情況對(duì)取自廣東汕頭的患病鮑血清中的NO/NOS、超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)、溶

6、菌酶(LZM)等活性進(jìn)行了研究?；疾□U血清中NO/NOS、SOD、ACP/AKP比健康鮑均有顯著提高(P＜0.05)，但LZM活性與對(duì)照組相比卻顯著降低(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明自然發(fā)病與人工感染的結(jié)果基本一致，即外源性病原菌可以誘導(dǎo)鮑體內(nèi)NOS的表達(dá)，進(jìn)而提高鮑血清中NO的水平。 4.注射L-精氨酸和環(huán)磷酰胺對(duì)雜色鮑血清中NO/NOS的影響研究了注射L-精氨酸和環(huán)磷酰胺對(duì)雜色鮑血清中NO/NOS的影響。分別對(duì)雜色鮑每公斤體

7、重注射250mg、500mg和1000mg的L-精氨酸和5mg、10mg、20mg的環(huán)磷酰胺的劑量，每隔5天足部肌肉注射1次，共注射3次。第16天檢測(cè)其血清中NO含量以及NOS活性的變化情況。結(jié)果顯示，注射500mg/kg的L-精氨酸可以顯著提高實(shí)驗(yàn)鮑血清中NO的含量和NOS的活力，而10mg/kg的環(huán)磷酰胺則可以顯著降低實(shí)驗(yàn)鮑血清中NO的含量和NOS的活力。為今后人為地調(diào)控鮑體內(nèi)的NO含量、增強(qiáng)其自身的非特異性免疫功能，從而提高抵抗疾

8、病的能力提供了理論依據(jù)。 5.NO/NOS與其他免疫指標(biāo)的關(guān)系在前文工作的基礎(chǔ)上，采用注射環(huán)磷酰胺的方法(劑量為10mg/kg)，對(duì)雜色鮑血清中NOS活性進(jìn)行了負(fù)調(diào)控，分別在注射后6h、12h、24h、48h、96h對(duì)NO/NOS、SOD、ACP、AKP以及LZM等活性進(jìn)行了測(cè)定，并探討了它們之間的相關(guān)性。研究結(jié)果表明，血清中NO/NOS、SOD、ACP、AKP、LZM等在注射環(huán)磷酰胺后有不同程度的降低，NOS與ACP、AKP以